Calnexin và BiP hoạt động như các chaperone phân tử tuần tự trong quá trình gấp nếp thyroglobulin trong lưới nội tế bào.

Trước khi bài tiết, thyroglobulin (Tg) mới tổng hợp gấp nếp thông qua một loạt các trung gian: các tập hợp liên kết disulfide và các monomer không gấp nếp --> các monomer đã gấp nếp --> các dimer. Ngay sau khi tổng hợp, rất ít Tg liên kết với calnexin (một chaperone phân tử gắn với màng trong lưới nội tế bào), trong khi phần lớn liên kết với BiP (một chaperone trong lưới nội tế bào); sự phân tách khỏi các chaperone này cho thấy động học có vẻ tương tự nhau. Calnexin có thể liên kết chọn lọc với carbohydrate bên trong glycoprotein, hoặc với bề mặt kỵ nước của các protein bài tiết khi chúng hình thành các liên kết disulfide thích hợp (Wada, I., W.-J. Ou, M.-C. Liu và G. Scheele, J. Biol. Chem. 1994. 269:7464-7472). Do Tg có nhiều liên kết disulfide, cũng như glycans, chúng tôi đã thử nghiệm một sự tiếp xúc ngắn với dithiothreitol ở tế bào thyrocyte sống, điều này dẫn đến sự kết tụ định lượng của Tg mới hình thành, được phân tích bằng SDS-PAGE của các tế bào bị ly giải mà không có sự khử tiếp theo. Các tế bào bị ly giải trong sự hiện diện của dithiothreitol dưới điều kiện không phân hủy cho phép các tập hợp Tg chạy như các monomer được khử. Đối với các tế bào bị ly giải theo cả hai cách, sau khi được khử in vivo, Tg đã đồng kết tủa với calnexin. Sau khi rửa sạch dithiothreitol, các tập hợp Tg mới xuất hiện hòa tan trong tế bào và cuối cùng được bài tiết. 1 giờ sau khi rửa sạch, > hoặc = 92% Tg được đánh dấu đã được phát hiện là tách rời khỏi calnexin, trong khi phần Tg được đánh dấu liên kết với BiP tăng từ 0 lên khoảng 40%, cho thấy một mối quan hệ "tiền chất-sản phẩm". Trong khi sự khử trong lòng ống là cần thiết cho sự đồng kết tủa hiệu quả của Tg với calnexin, quá trình glycosyl hóa Tg là không cần thiết. Dữ liệu này nằm trong số những dữ liệu đầu tiên chứng minh chức năng chaperone tuần tự liên quan đến sự trưởng thành về cấu hình của các protein bài tiết mới hình thành trong lưới nội tế bào.