Các tế bào của sinh vật đơn bào Tetrahymena thermophila sản xuất các hợp chất có tác dụng như các yếu tố tồn tại và/hoặc tăng trưởng tự tiết (bán tiết). 8‐Bromo cyclic GMP, sodium nitroprusside, hemin, protoporphyrin IX, insulin tái tổ hợp của người và insulin bò đã được thử nghiệm khả năng thay thế cho các yếu tố do tế bào sản xuất và kích thích sự sống sót và tăng sinh của tế bào. Các tế bào được cấy vào flask hình nón trong môi trường dinh dưỡng hoàn chỉnh, có thành phần hóa học xác định với mật độ tế bào từ 5 đến 5000 tế bào/ml. Trong môi trường không bổ sung, tế bào với mật độ từ 5 đến 500 tế bào/ml (‘nuôi cấy có mật độ tế bào ban đầu thấp’) đã chết trong vòng 8 giờ, trong khi tế bào ở mật độ 1000 và 5000 tế bào/ml (‘nuôi cấy có mật độ tế bào ban đầu cao’) đã tăng sinh với giai đoạn đình trệ kéo dài lên tới 4 giờ. Trong sự hiện diện của các hợp chất insulin, hemin, protoporphyrin IX hoặc 8‐bromo cyclic GMP, các tế bào cũng tăng sinh ở tất cả các mật độ tế bào ban đầu thấp. Sodium nitroprusside có hiệu quả ở hai dải nồng độ khác nhau: ở mức nanomolar cũng như ở mức pico đến femtomolar thấp. Tại mật độ quần thể ban đầu lên đến 50 tế bào/ml, các tế bào ở cả hai nồng độ sodium nitroprusside sống lâu gấp khoảng 4 lần so với nhóm kiểm soát. Tại mật độ 500 tế bào/ml, các tế bào ở nồng độ cao của sodium nitroprusside sống lâu gấp khoảng 4 lần so với các tế bào của các nuôi cấy kiểm soát; chúng tăng sinh ở nồng độ thấp của sodium nitroprusside. Nồng độ hemin, quá thấp để có bất kỳ tác động nào riêng lẻ, đã có tác động hiệp lực với sodium nitroprusside. NG‐methyl‐L‐arginine ức chế sự tăng sinh ở mật độ tế bào ban đầu cao. Hành động ức chế này đã được giảm bớt bởi nồng độ cao của L‐arginine, protoporphyrin IX, sodium nitroprusside hoặc 8‐bromo cGMP, nhưng không phải do insulin. Methylene blue đã ức chế sự tăng sinh của tế bào ở mật độ tế bào ban đầu cao. Sự ức chế này đã được vượt qua bằng cách thêm 8‐bromo cGMP. Các phát hiện rằng vật liệu liên quan đến insulin có thể được giải phóng từ Tetrahymena và rằng insulin và sodium nitroprusside làm tăng cGMP nội bào trong các tế bào này được thảo luận liên quan đến các kết quả đã trình bày. Tất cả các quan sát này cho thấy rằng cGMP có vai trò hỗ trợ sự sống sót của tế bào trong Tetrahymena và chuyển các tế bào sang chế độ tăng sinh của chúng, và rằng các phân tử tín hiệu do tế bào sản xuất và insulin kích thích một guanylate cyclase phụ thuộc vào NO để sản xuất cGMP.
