Karilyn Larkin1,2, Erin Guth2, Bonnie K. Harrington3, Nicole Grieselhuber1,2, Natarajan Muthusamy1,2, John C. Byrd1,2
1Division of Hematology, Department of Internal Medicine, The Ohio State University, Columbus, OH
2The Ohio State University Comprehensive Cancer Center, Columbus, OH
3College of Veterinary Medicine, The Ohio State University, Columbus, OH
Tóm tắt
Tóm tắt
Cơ sở: Bệnh bạch cầu myeloid cấp tính (AML) là một căn bệnh mà cần thiết có liệu pháp hiệu quả hơn và ít độc hại hơn. Liệu pháp dựa trên kháng thể đã đạt được thành công hạn chế do thiếu sự đồng nhất trong kiểu hình miễn dịch ở AML cũng như sự chồng chéo với các tế bào gốc huyết học bình thường (HSCs). CD37 là một tetraspanin được đặc trưng nhiều nhất cho vai trò trong phát triển tế bào B và phản ứng miễn dịch (Van Spriel et al., 2004, 2009, 2012), gần đây được chứng minh là được biểu hiện trên các tế bào AML nhưng không có ở các HSC bình thường (Pereira et al., 2015). Debio 1562 (trước đây là IMGN529) là một thuốc kháng thể dẫn xuất rất mạnh (ADC) nhằm vào CD37, bao gồm kháng thể K7153A liên kết với chất ức chế vi ống (DM1) và đã cho thấy khả năng dung nạp và hiệu quả trong các thử nghiệm lâm sàng giai đoạn đầu ở các khối u lympho. Chúng tôi đã đánh giá biểu hiện của CD37 trên các mẫu AML nguyên phát cũng như hoạt động của Debio 1562 trong cả hệ thống mô hình AML in vitro và in vivo.
Phương pháp: Các thử nghiệm MTS đã được sử dụng để đánh giá khả năng sống sót tương đối ở các dòng tế bào AML có (THP1, OCI-AML3) hoặc không (KG-1a) biểu hiện CD37. Các tế bào được điều trị bằng ADC, hoặc gánh nặng liên kết với một kháng thể loại (Iso-DM1) hoặc một đối chứng chất mang trong 72 giờ. Sau khi xác định IC50 cho mỗi dòng tế bào, phân tích dòng chảy Annexin V/PI được thực hiện để đánh giá sự apoptosis và tử vong tế bào. Các dòng tế bào THP-1 và OCI-AML3 knockout CD37 đã được tạo ra bằng cách sử dụng hệ thống CRISPR Cas9 có thể kích hoạt và được đánh giá bằng MTS và Annexin V/PI sau khi xác nhận sự giảm biểu hiện CD37. Các mẫu AML nguyên phát được lấy để đánh giá biểu hiện CD37 bằng phương pháp phân tích dòng chảy sử dụng K7153A-PE và được sử dụng riêng để đánh giá độc tính trực tiếp trong một thử nghiệm in vitro. Các tế bào đơn nhân máu ngoại vi từ bệnh nhân AML mới được chẩn đoán đã được điều trị bằng liệu pháp, tế bào được thu hoạch sau 72 giờ và sau đó nhuộm bằng CD2/CD19/CD45 cũng như EdU để đánh giá mức độ phát triển và phân tích bằng phương pháp phân tích dòng chảy với sự bổ sung của hạt Countbright để đo số lượng tế bào tuyệt đối. Đánh giá liệu pháp in vivo được thực hiện trên chuột NSG được cấy ghép dòng tế bào THP1, và sau đó được điều trị bằng ADC, Iso-DM1 hoặc đối chứng. Chuột được điều trị hai lần mỗi tuần với liều 10mg/kg qua đường tiêm bụng, trong tổng số 7 lần tiêm. Chuột được theo dõi về sự sống sót tổng thể.
Kết quả: Phân tích cơ sở dữ liệu TCGA cho thấy bệnh nhân AML có mức độ transcript CD37 cao hơn có tuổi thọ tổng thể thấp hơn (p<0.0001). Các thử nghiệm MTS và Annexin V/PI trên các dòng tế bào cho thấy độc tính chọn lọc, phụ thuộc vào liều ở các tế bào AML biểu hiện CD37 (Debio 1562 IC50 dao động từ 0.1-1ug/ml), với độc tính tối thiểu được quan sát thấy ở liều tối đa 5ug/ml của Iso-DM1, và không có độc tính ở các tế bào CD37 knockout tương ứng. Các mẫu AML nguyên phát cũng cho thấy sự giảm chọn lọc ở các tế bào bạch cầu khi được điều trị bằng ADC trong 72 giờ trong môi trường nuôi cấy có hỗ trợ cytokine của người, đặc biệt ở các mẫu có mức độ phát triển cao hơn khi nuôi cấy (p=0.0156). Các nghiên cứu xenograft THP1 cho thấy không chỉ kéo dài lợi thế sống sót (p<0.0001), mà còn loại bỏ căn bệnh qua đánh giá mô học ở những động vật được điều trị bằng Debio 1562.
Kết luận: CD37 được biểu hiện trên một loạt các loại phụ của AML, và mức độ transcript cao hơn của biểu hiện CD37 liên quan đến sự giảm tỷ lệ sống sót. Mặc dù phần lớn các mẫu nguyên phát cho thấy biểu hiện tối thiểu đến vừa của protein khi so với tế bào B lympho, CD37 là một mục tiêu hiệu quả trên các tế bào AML khi sử dụng Debio 1562. Các nghiên cứu bổ sung đang được tiến hành để đánh giá cơ chế vận chuyển CD37 trong các tế bào myeloid cũng như khả năng tăng cường mục tiêu quan trọng này. Công trình này cung cấp lý do cho các thử nghiệm lâm sàng giai đoạn I của Debio 1562 trên bệnh nhân AML, cũng như chứng minh CD37 là mục tiêu tiềm năng cho các liệu pháp miễn dịch CD37 khác.
Hình. Hình.
Các tiết lộ
Không có xung đột lợi ích liên quan nào được công bố.
