Francesca Levi-Schaffer, Paige Lacy, Nicholas J. Severs, Terence M. Newman, Janet North, Bastien Gomperts, A. Barry Kay, Redwan Moqbel
Tóm tắt
Chúng tôi đã chỉ ra rằng bạch cầu ái toan trong máu ngoại vi có mật độ bình thường của con người phiên mã và dịch mã mRNA cho yếu tố kích thích thuộc địa đại thực bào-bạch cầu (GM-CSF) và phân bố nội bào của nó là dạng hạt khi được xác định bằng sinh thiết miễn dịch ánh sáng. Nghiên cứu hiện tại được tiến hành để xác nhận mối liên hệ dường như này giữa GM-CSF và hạt tinh thể bằng phương pháp phân đoạn tế bào con đối với bạch cầu ái toan của con người và kính hiển vi điện tử miễn dịch vàng (EM). Bạch cầu ái toan trong máu ngoại vi của con người được tinh chế cao (> 99%, bằng cách chọn lọc âm thông qua microbeads miễn dịch kháng thể anti-CD16) đã được thu được từ bốn đối tượng mắc bệnh hen suyễn (không sử dụng thuốc toàn thân), được đồng nhất hóa và phân đoạn theo mật độ (5 x 10(7) tế bào/đối tượng) trên gradient Nycodenz tuyến tính. Hai mươi bốn phân đoạn được thu thập từ mỗi chế phẩm tế bào và được phân tích hoạt động enzyme đánh dấu cũng như protein tổng. Phân tích dot blot với các kháng thể đơn dòng (MoAbs) đặc hiệu đã được sử dụng để phát hiện protein hạt của bạch cầu ái toan là protein cơ bản chủ yếu (MBP) và protein cationic bạch cầu ái toan (ECP). Một kháng thể đơn dòng anti-CD9 đã được sử dụng như một dấu hiệu của màng tế bào bạch cầu ái toan. Lactate dehydrogenase (LDH) được sử dụng như một dấu hiệu tế bào chất. Tính tương tác miễn dịch của GM-CSF được phát hiện bằng cách sử dụng một xét nghiệm miễn dịch liên kết enzyme cụ thể với kháng thể đa dòng chống lại GM-CSF của người và được xác nhận bằng dot blot. GM-CSF đồng elu với các phân đoạn tế bào chứa các dấu hiệu hạt (MBP, ECP, peroxidase bạch cầu ái toan, hexosaminidase và arylsulphatase), nhưng không với những phân đoạn chứa tế bào chất (LDH+) hoặc màng (CD9+) khác. Việc kiểm tra EM của các phân đoạn đã được nhóm lại liên quan đến đỉnh của tính tương tác miễn dịch GM-CSF đã xác nhận rằng chúng chứa các hạt tinh thể và hạt nhỏ, nhưng không có màng tế bào. Ngoài ra, việc định lượng, sử dụng dấu vàng miễn dịch với kháng thể MoAb chống lại GM-CSF, cho thấy sự định vị ưu tiên của các hạt vàng trên các lõi hạt bạch cầu ái toan của các tế bào còn nguyên vẹn. Do đó, kết quả của chúng tôi chỉ ra rằng GM-CSF cư trú như một trung gian lưu giữ liên kết với hạt ở bạch cầu ái toan người chưa kích thích.
