Akt Điều Chỉnh Vị Trí Tế Bào Của Protein Kết Nối Rab27a JFC1 Thông Qua Phosphorylation

Traffic - Tập 6 Số 8 - Trang 667-681 - 2005
Jennifer L. Johnson1, Sandrine Pacquelet1, William S. Lane2, Boreth Eam1, Sergio Catz1
1Division of Biochemistry, Department of Molecular and Experimental Medicine, The Scripps Research Institute, 10550 North Torrey Pines Road, La Jolla, CA 92037, USA
2Microchemistry and Proteomics Analysis Facility, Department of Molecular and Cellular Biology, Harvard University, 16 Divinity Ave, Cambridge, MA 02138, USA

Tóm tắt

Trong nghiên cứu này, chúng tôi cho thấy protein kết nối Rab27a JFC1/Slp1 (protein giống synaptotagmin) được điều chỉnh bởi phosphorylation do Akt trung gian. Sử dụng tế bào LNCaP không có phosphatase và tensin homolog và chất ức chế phosphatidylinositol 3-kinase LY294002, chúng tôi cho thấy sự phosphoryl hóa của JFC1 nội sinh phụ thuộc vào đường dẫn phosphatidylinositol 3-kinase/Akt. JFC1 đã được phosphoryl hóa trong các tế bào biểu hiện Akt hoạt động liên tục, xác nhận rằng nó là một cơ chất của Akt in vivo. Việc phosphoryl hóa trực tiếp JFC1 bởi Akt cũng đã được xác nhận in vitro. Sử dụng sắc ký lọc lỏng hiệu suất cao với khối phổ tách đôi, chúng tôi đã xác định năm vị trí phosphoryl hóa Akt trong JFC1. Qua phân tích đột biến và sau đó là loại bỏ miễn dịch (IP), chúng tôi đã xác lập rằng Akt phosphoryl hóa JFC1 ở serine 241. JFC1 và Rab27a đồng vị trí trong gần màng plasma ở các tế bào LNCaP. Sự tương tác đã được xác nhận qua phân tích IP và bị loại bỏ bởi đột biến điểm W83S trong JFC1. Phosphoryl hóa không làm thay đổi khả năng của JFC1 để kết nối với Rab27a. Thay vào đó, phosphoryl hóa bởi Akt giảm mạnh khi JFC1 liên kết với Rab27a. Cuối cùng, chúng tôi chứng minh rằng như một hệ quả của việc phosphoryl hóa in vivo, JFC1 tách khỏi màng, thúc đẩy JFC1 phân bố lại vào bào tương. Kết quả của chúng tôi gợi ý rằng Akt điều chỉnh chức năng JFC1/Slp1 thông qua phosphoryl hóa và có thể có tác động đến sự tiết bọc chứa Rab27a.

Từ khóa


Tài liệu tham khảo

10.1038/35052055

10.1126/stke.2001.100.re11

10.1126/science.276.5316.1255

10.1074/jbc.M011167200

10.1006/bbrc.2001.4512

10.1074/jbc.274.40.28542

10.1016/S0006-291X(02)00320-0

10.1038/ncb760

10.1074/jbc.M112414200

10.1074/jbc.M202574200

10.1128/MCB.22.6.1858-1867.2002

10.1034/j.1600-0854.2002.030305.x

10.1091/mbc.E03-07-0452

10.1016/S1471-4914(01)02227-4

10.1073/pnas.172382799

10.1073/pnas.93.23.13327

10.1016/S0166-2236(99)01436-8

10.1016/0896-6273(92)90072-L

10.1074/jbc.271.24.14548

10.1523/JNEUROSCI.13-04-01701.1993

10.1016/S1097-2765(00)00140-4

Foletti DL, 2001, Physiological modulation of rabphilin phosphorylation, J Neurosci, 21, 5473, 10.1523/JNEUROSCI.21-15-05473.2001

10.1242/jcs.114.16.2903

10.1016/S0968-0004(01)01958-2

10.1016/S0968-0004(97)01097-9

10.1016/S0960-9822(06)00122-9

10.1074/jbc.M406731200

10.1016/S0014-5793(96)01370-1

10.1016/S1097-2765(02)00776-1

10.1073/pnas.1031526100

10.1002/(SICI)1097-0045(20000101)42:1<1::AID-PROS1>3.0.CO;2-Y

Davies MA, 1999, Regulation of Akt/PKB activity, cellular growth, and apoptosis in prostate carcinoma cells by MMAC/PTEN, Cancer Res, 59, 2551

10.1016/S0092-8674(02)01083-8

10.1074/jbc.M205838200

10.1016/S1097-2765(01)00324-0

10.4049/jimmunol.170.10.5302

10.1074/jbc.275.12.8271

10.1073/pnas.191369598

10.1074/jbc.M001207200

10.1042/BJ20020345

10.1016/S0092-8674(00)80549-8

10.1128/MCB.22.15.5518-5526.2002

10.1016/S0022-1759(99)00171-4

10.1074/jbc.M213090200

10.1034/j.1600-0854.2002.030205.x

10.1083/jcb.152.4.843

10.1038/8967

10.1210/en.143.5.1817

10.1074/jbc.C100174200

10.1006/meth.2000.0953

10.1091/mbc.01-12-0595

10.1016/1044-0305(94)80016-2

10.1021/bi981042r

Thông tin
Thông tin xuất bản

Traffic

Tập 6 Số 8

667-681

Thông tin tác giả