Một phương pháp miễn dịch kết tủa đơn giản hóa để đo lường định lượng phản ứng kháng thể trong mẫu huyết thanh lâm sàng bằng cách sử dụng protein fusion kháng nguyên Renillaluciferase được sản xuất từ động vật có vú
Tóm tắt
Các xét nghiệm phát hiện kháng thể đặc hiệu kháng nguyên người có lợi ích y tế. Tuy nhiên, tính hữu ích của các định dạng miễn dịch đơn giản hiện có bị giới hạn bởi những cân nhắc về kỹ thuật như sự hiện diện của kháng thể trong huyết thanh đối với các tạp chất trong kháng nguyên chưa đủ tinh khiết, một vấn đề có thể trở nên nghiêm trọng hơn khi các bộ kháng nguyên được sàng lọc để thu thập dữ liệu có ích trong lâm sàng.
Chúng tôi đã phát triển một công nghệ miễn dịch kết tủa đơn giản và mới để xác định huyết thanh lâm sàng chứa các kháng thể đặc hiệu kháng nguyên và để tạo ra hồ sơ phản ứng kháng thể định lượng. Phương pháp này dựa trên việc ghép nối các kháng nguyên protein với một enzyme báo cáo,
Chúng tôi đã đặc trưng công nghệ này với huyết thanh từ những bệnh nhân mắc ba loại ung thư khác nhau. Chúng tôi cho thấy rằng 20-85% số huyết thanh này chứa nồng độ kháng thể đáng kể chống lại ít nhất một trong năm protein liên quan đến u bị đột biến và/hoặc overexpressed. Năm trong số sáu mẫu huyết thanh ung thư đại tràng thử nghiệm cho phản ứng có ý nghĩa thống kê lớn hơn mức trung bình cộng ba độ lệch chuẩn của 10 mẫu huyết thanh đối chứng. Kết quả của các thí nghiệm đối kháng, ủ trước huyết thanh dương tính với các kháng nguyên được sản xuất từ
Công nghệ này có một số lợi thế so với các xét nghiệm miễn dịch định lượng hiện tại bao gồm tính đơn giản tương đối của nó, sự tránh của các vấn đề liên quan đến các kháng nguyên do
Từ khóa
Tài liệu tham khảo
Old LJ, Chen YT: New paths in human cancer serology. J Exp Med. 1998, 187: 1163-1167. 10.1084/jem.187.8.1163.
Preuss KD, Zwick C, Bormann C, Neumann F, Pfreundschuh M: Analysis of the B-cell repertoire against antigens expressed by human neoplasms. Immunol Rev. 2002, 188: 43-50. 10.1034/j.1600-065X.2002.18805.x.
Wadhwa M, Skog AL, Bird C, Ragnhammar P, Lilljefors M, Gaines-Das R, Mellstedt H, Thorpe R: Immunogenicity of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) products in patients undergoing combination therapy with GM-CSF. Clin Cancer Res. 1999, 5: 1353-1361.
Burbelo PD, Kisailus AE, Peck JW: Detecting protein-protein interactions using Renilla luciferase fusion proteins. Biotechniques. 2002, 33: 1044-1048. 1050.
Vogelstein B, Kinzler KW: Cancer genes and the pathways they control. Nat Med. 2004, 10: 789-799. 10.1038/nm1087.
Bardelli A, Parsons DW, Silliman N, Ptak J, Szabo S, Saha S, Markowitz S, Willson JK, Parmigiani G, Kinzler KW, Vogelstein B, Velculescu VE: Mutational analysis of the tyrosine kinome in colorectal cancers. Science. 2003, 300: 949-10.1126/science.1082596.
Wang Z, Shen D, Parsons DW, Bardelli A, Sager J, Szabo S, Ptak J, Silliman N, Peters BA, van der Heijden MS, Parmigiani G, Yan H, Wang TL, Riggins G, Powell SM, Willson JKV, Markowitz S, Kinzler KW, Vogelstein B, Velculescu VE: Mutational analysis of the tyrosine phosphatome in colorectal cancers. Science. 2004, 304: 1164-1166. 10.1126/science.1096096.
Wang Z, Cummins JM, Shen D, Cahill DP, Jallepalli PV, Wang TL, Parsons DW, Traverso G, Awad M, Silliman N, Ptak J, Szabo S, Willson JKV, Markowitz S, Goldberg ML, Karess R, Kinzler KW, Vogelstein B, Velculescu VE, Langauer C: Three classes of genes mutated in colorectal cancers with chromosomal instability. Cancer Res. 2004, 64: 2998-3001.
Rajagopalan H, Jallepalli PV, Rago C, Velculescu VE, Kinzler KW, Vogelstein B, Lengauer C: Inactivation of hCDC4 can cause chromosomal instability. Nature. 2004, 428: 77-81. 10.1038/nature02313.
Samuels Y, Wang Z, Bardelli A, Silliman N, Ptak J, Szabo S, Yan H, Gazdar A, Powell SM, Riggins GJ, Willson JKV, Markowitz S, Kinzler KW, Vogelstein B, Velculescu VE: High frequency of mutations of the PIK3CA gene in human cancers. Science. 2004, 304: 554-10.1126/science.1096502.
Perou CM, Sorlie T, Eisen MB, van de Rijn M, Jeffrey SS, Rees CA, Pollack JR, Ross DT, Johnsen H, Akslen LA, Fluge O, Pergamenschikov A, Williams CL, Xhu SX, Lonning PE, Borresen-Dale AL, Brown PO, Botstein D: Molecular portraits of human breast tumours. Nature. 2000, 406: 747-752. 10.1038/35021093.
van't Veer LJ, Dai H, van de Vijver MJ, He YD, Hart AA, Mao M, Peterse HL, van der Kooy K, Marton MJ, Witteveen AT, Schreiber GJ, Kerkhoven RM, Roberts C, Lisley PS, Bernards R, Friend SH: Gene expression profiling predicts clinical outcome of breast cancer. Nature. 2002, 415: 530-536. 10.1038/415530a.
Sorlie T, Perou CM, Tibshirani R, Aas T, Geisler S, Johnsen H, Hastie T, Eisen MB, van de Rijn M, Jeffrey SS, Thorsen T, Quist H, Matese JC, Brown PO, Botstein D, Lonning PE, Borresen-Dale AL: Gene expression patterns of breast carcinomas distinguish tumor subclasses with clinical implications. Proc Natl Acad Sci U S A. 2001, 98: 10869-10874. 10.1073/pnas.191367098.
Sorlie T, Tibshirani R, Parker J, Hastie T, Marron JS, Nobel A, Deng S, Johnsen H, Pesich R, Geisler S, Demeter J, Perou CM, Lonning PE, Brown PO, Borresen-Dale AL, Botstein D: Repeated observation of breast tumor subtypes in independent gene expression data sets. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003, 100: 8418-8423. 10.1073/pnas.0932692100.
Sotiriou C, Neo SY, McShane LM, Korn EL, Long PM, Jazaeri A, Martiat P, Fox SB, Harris AL, Liu ET: Breast cancer classification and prognosis based on gene expression profiles from a population-based study. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003, 100: 10393-10398. 10.1073/pnas.1732912100.
Takahashi M, Chen W, Byrd DR, Disis ML, Huseby ES, Qin H, McCahill L, Nelson H, Shimada H, Okuno K: Antibody to ras proteins in patients with colon cancer. Clin Cancer Res. 1995, 1: 1071-1077.
Soussi T: p53 Antibodies in the sera of patients with various types of cancer: a review. Cancer Res. 2000, 60: 1777-1788.
Lubin R, Schlichtholz B, Bengoufa D, Zalcman G, Tredaniel J, Hirsch A, de Fromentel CC, Preudhomme C, Fenaux P, Fournier G.: Analysis of p53 antibodies in patients with various cancers define B-cell epitopes of human p53: distribution on primary structure and exposure on protein surface. Cancer Res. 1993, 53: 5872-5876.
Vennegoor CJ, Nijman HW, Drijfhout JW, Vernie L, Verstraeten RA, von Mensdorff-Pouilly S, Hilgers J, Verheijen RH, Kast WM, Melief CJ, Kenemans P: Autoantibodies to p53 in ovarian cancer patients and healthy women: a comparison between whole p53 protein and 18-mer peptides for screening purposes. Cancer Lett. 1997, 116: 93-101. 10.1016/S0304-3835(97)00168-7.
Ishikawa T, Fujita T, Suzuki Y, Okabe S, Yuasa Y, Iwai T, Kawakami Y: Tumor-specific immunological recognition of frameshift-mutated peptides in colon cancer with microsatellite instability. Cancer Res. 2003, 63: 5564-5572.
Fensterle J, Becker JC, Potapenko T, Heimbach V, Vetter CS, Brocker EB, Rapp UR: B-Raf specific antibody responses in melanoma patients. BMC Cancer. 2004, 4: 62-10.1186/1471-2407-4-62.
Stockert E, Jager E, Chen YT, Scanlan MJ, Gout I, Karbach J, Arand M, Knuth A, Old LJ: A survey of the humoral immune response of cancer patients to a panel of human tumor antigens. J Exp Med. 1998, 187: 1349-1354. 10.1084/jem.187.8.1349.
Zhang JY, Casiano CA, Peng XX, Koziol JA, Chan EK, Tan EM: Enhancement of antibody detection in cancer using panel of recombinant tumor-associated antigens. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 2003, 12: 136-143.
Bjorck L, Kronvall G: Purification and some properties of streptococcal protein G, a novel IgG-binding reagent. J Immunol. 1984, 133: 969-974.
Utz PJ, Gensler TJ, Anderson P: Death, autoantigen modifications, and tolerance. Arthritis Res. 2000, 2: 101-114. 10.1186/ar75.
Schellekens GA, de Jong BA, van den Hoogen FH, van de Putte LB, van Venrooij WJ: Citrulline is an essential constituent of antigenic determinants recognized by rheumatoid arthritis-specific autoantibodies. J Clin Invest. 1998, 101: 273-281.
Yamada R, Suzuki A, Chang X, Yamamoto K: Citrullinated proteins in rheumatoid arthritis. Front Biosci. 2005, 10: 54-64.
Koenen M, Ruther U, Muller-Hill B: Immunoenzymatic detection of expressed gene fragments cloned in the lac Z gene of E. coli. Embo J. 1982, 1: 509-512.
Ruther U, Koenen M, Sippel AE, Muller-Hill B: Exon cloning: immunoenzymatic identification of exons of the chicken lysozyme gene. Proc Natl Acad Sci U S A. 1982, 79: 6852-6855.
Phizicky EM, Fields S: Protein-protein interactions: methods for detection and analysis. Microbiol Rev. 1995, 59: 94-123.
Bode AM, Dong Z: Post-translational modification of p53 in tumorigenesis. Nat Rev Cancer. 2004, 4: 793-805. 10.1038/nrc1455.
Hammel P, Boissier B, Chaumette MT, Piedbois P, Rotman N, Kouyoumdjian JC, Lubin R, Delchier JC, Soussi T: Detection and monitoring of serum p53 antibodies in patients with colorectal cancer. Gut. 1997, 40: 356-361.
Crawford LV, Pim DC, Bulbrook RD: Detection of antibodies against the cellular protein p53 in sera from patients with breast cancer. Int J Cancer. 1982, 30: 403-408.