Một phương pháp xét nghiệm mới cho glycosphingolipid deacylase bằng cách phát hiện lysoglycosphingolipid bằng miễn dịch hóa học liên kết enzyme

Lipids - 2001
Kazuo Izumi1, Minoru Sawada1
1Hokkaido National Industrial Research Institute. AIST. MITI, 2-17-2-1 Tsukisamu-Higashi, Toyohira-ku, Sapporo, 062-8517 Japan

Tóm tắt

Tóm tắtLysoglycosphingolipids bao gồm một cơ sở chuỗi dài sphingoid và monosaccharide hoặc đường phức tạp, và chúng thiếu nhóm axit béo có trong glycosphingolipid nguyên bản. Ít hơn 1 pmol lyso‐Forssman glycolipid và lysoganglioside GM1 đã được phát hiện trên sắc ký lớp mỏng bằng phương pháp màu sắc miễn dịch hóa học liên kết enzyme với kháng thể chống lại glycosphingolipid Forssman (FOM‐1) và phân tử B của độc tố tả, tương ứng. Mỗi đốm giữa 1 và 100 pmol lyso‐Forssman glycolipid được nhuộm miễn dịch dày như lượng tương đương glycosphingolipid Forssman nguyên bản. Mật độ của các đốm lyso‐Forssman glycolipid tăng tỷ lệ với sự gia tăng lượng lysoglycolipid. Mật độ của các đốm 0.2–100 pmol lysoganglioside GM1 cũng tỷ lệ với lượng của mỗi đốm lyso‐GM1. Những kết quả này chỉ ra rằng lượng glycosphingolipid deacylated từ 1 đến 100 pmol có thể được định lượng bởi phương pháp nhuộm hóa miễn dịch với kháng thể đặc hiệu chuỗi đường. Glycosphingolipid deacylase, enzyme cắt liên kết amide giữa cơ sở chuỗi dài sphingoid và chuỗi axit béo trong ceramide của glycosphingolipid, đã được kiểm tra bằng cách phát hiện lyso‐Forssman glycolipid được sản xuất. Các hợp chất lipophilic, được thu hồi từ mẫu tỉ lệ của hỗn hợp phản ứng giữa glycosphingolipid Forssman và enzyme thô vào thời điểm thích hợp, đã được phân tích bằng sắc ký lớp mỏng. Kết quả cho thấy lyso‐Forssman glycolipid được sản xuất trong 1–2 giờ đầu tiên bởi enzyme và sản xuất tăng lên cùng với thời gian ủ. Phương pháp nhuộm này nhạy cảm và đặc hiệu hơn so với phương pháp quan sát với tác nhân không đặc hiệu như thuốc thử orcinol‐axit sulfuric.

Từ khóa


Tài liệu tham khảo

10.1016/S0022-2275(20)39839-4

10.1111/j.1471-4159.1982.tb07950.x

10.1016/0005-2760(82)90272-7

10.1016/0006-291X(89)90037-5

10.1111/j.1471-4159.1989.tb01844.x

10.1515/bchm3.1986.367.1.241

10.1111/j.1471-4159.1992.tb08460.x

10.1007/BF01209832

10.1093/oxfordjournals.jbchem.a122212

10.1271/bbb.59.2028

10.1074/jbc.270.41.24370

10.1093/oxfordjournals.jbchem.a134760

10.1016/0005-2760(76)90054-0

Handa S., 1963, Blood Group Active Glycolipid from Human Erythrocytes, Jpn. J. Exp. Med., 33, 347

10.1016/S0022-2275(20)39537-7

Thông tin
Thông tin xuất bản

Lipids

Thông tin tác giả