Journal of Cell Biology
Công bố khoa học tiêu biểu
* Dữ liệu chỉ mang tính chất tham khảo
Sắp xếp:
ZP3-dependent activation of sperm cation channels regulates acrosomal secretion during mammalian fertilization.The sperm acrosome reaction is a Ca(2+)-dependent secretory event required for fertilization. Adhesion to the egg's zona pellucida promotes Ca2+ influx through voltage-sensitive channels, thereby initiating secretion. We used potentiometric fluorescent probes to determine the role of sperm membrane potential in regulating Ca2+ entry. ZP3, the glycoprotein agonist of the zona pellucida, depolarizes sperm membranes by activating a pertussis toxin-insensitive mechanism with the characteristics of a poorly selective cation channel. ZP3 also activates a pertussis toxin-sensitive pathway that produces a transient rise in internal pH. The concerted effects of depolarization and alkalinization open voltage-sensitive Ca2+ channels. These observations suggest that mammalian sperm utilize membrane potential-dependent signal transduction mechanisms and that a depolarization pathway is an upstream transducing element coupling adhesion to secretion during fertilization.
Journal of Cell Biology - Tập 134 Số 3 - Trang 637-645 - 1996
The expression of myosin genes in developing skeletal muscle in the mouse embryo.Using in situ hybridization, we have investigated the temporal sequence of myosin gene expression in the developing skeletal muscle masses of mouse embryos. The probes used were isoform-specific, 35S-labeled antisense cRNAs to the known sarcomeric myosin heavy chain and myosin alkali light chain gene transcripts. Results showed that both cardiac and skeletal myosin heavy chain and myosin light chain mRNAs were first detected between 9 and 10 d post coitum (p.c.) in the myotomes of the most rostral somites. Myosin transcripts appeared in more caudal somites at later stages in a developmental gradient. The earliest myosin heavy chain transcripts detected code for the embryonic skeletal (MHCemb) and beta-cardiac (MHC beta) isoforms. Perinatal myosin heavy chain (MHCpn) transcripts begin to accumulate at 10.5 d p.c., which is much earlier than previously reported. At this stage, MHCemb is the major MHC transcript. By 12.5 d p.c., MHCpn and MHCemb mRNAs are present to an equal extent, and by 15.5 d p.c. the MHCpn transcript is the major MHC mRNA detected. Cardiac MHC beta transcripts are always present as a minor component. In contrast, the cardiac MLC1A mRNA is initially more abundant than that encoding the skeletal MLC1F isoform. By 12.5 d p.c. the two MLC mRNAs are present at similar levels, and by 15.5 d p.c., MLC1F is the predominant MLC transcript detected. Transcripts for the ventricular/slow (MLC1V) and another fast skeletal myosin light chain (MLC3F) are not detected in skeletal muscle before 15 d p.c., which marks the beginning of the fetal stage of muscle development. This is the first stage at which we can detect differences in expression of myosin genes between developing muscle fibers. We conclude that, during the development of the myotome and body wall muscles, different myosin genes follow independent patterns of activation and accumulation. The data presented are the first detailed study of myosin gene expression at these early stages of skeletal muscle development.
Journal of Cell Biology - Tập 111 Số 4 - Trang 1465-1476 - 1990
The amplified expression of factors regulating myogenesis in L6 myoblasts.A strategy for increasing the expression of the factors regulating myogenesis was developed based upon the observation that increased amounts of regulatory factors could overcome the inhibition of differentiation produced by 5-bromodeoxyuridine (BUdR). L6 rat myoblasts were subjected to multiple cycles of cloning in progressively increasing concentrations of BUdR. The first clones to differentiate were picked and replated for the next cycle of selection. After 28 cycles in BUdR, cells were isolated that could differentiate in the presence of 8 microM BUdR. Cell hybrids between myoblasts subjected to 21 cycles of selection (BU21 cells) and differentiation-defective myoblasts exhibited a high probability of differentiation, consistent with the hypothesis that BU21 cells were overproducing factor(s) involved in the decision to differentiate. The selection of cells able to differentiate in the presence of BUdR may provide a general approach for increasing the expression of the regulatory molecules controlling terminal differentiation.
Journal of Cell Biology - Tập 100 Số 1 - Trang 311-316 - 1985
Endocrine secretory granules and neuronal synaptic vesicles have three integral membrane proteins in common.In response to an external stimulus, neuronal cells release neurotransmitters from small synaptic vesicles and endocrine cells release secretory proteins from large dense core granules. Despite these differences, endocrine cells express three proteins known to be components of synaptic vesicle membranes. To determine if all three proteins, p38, p65, and SV2, are present in endocrine dense core granule membranes, monoclonal antibodies bound to beads were used to immunoisolate organelles containing the synaptic vesicle antigens. [3H]norepinephrine was used to label both chromaffin granules purified from the bovine adrenal medulla and rat pheochromocytoma (PC12) cells. Up to 80% of the vesicular [3H]norepinephrine was immunoisolated from both labeled purified bovine chromaffin granules and PC12 postnuclear supernatants. In PC12 cells transfected with DNA encoding human growth hormone, the hormone was packaged and released with norepinephrine. 90% of the sedimentable hormone was also immunoisolated by antibodies to all three proteins. Stimulated secretion of PC12 cells via depolarization with 50 mM KCl decreased the amount of [3H]norepinephrine or human growth hormone immunoisolated. Electron microscopy of the immunoisolated fractions revealed large (greater than 100 nm diameter) dense core vesicles adherent to the beads. Thus, large dense core vesicles containing secretory proteins possess all three of the known synaptic vesicle membrane proteins.
Journal of Cell Biology - Tập 106 Số 1 - Trang 51-59 - 1988
Subcellular localization and quantitation of the major neutrophil pertussis toxin substrate, Gn.The subcellular distribution of G protein subunits in the neutrophil was examined. Cells were nitrogen cavitated and subcellular organelles fractionated on discontinuous sucrose gradients. The presence of GTP-binding regulatory protein (G protein) alpha and beta/gamma subunits in each organelle was determined using three methods of analysis: specific binding of guanine nucleotide, ADP ribosylation by pertussis toxin, and immunoblot analysis with subunit-specific G protein antibodies. Both plasma membrane and cytosolic G protein components were detected. In contrast, neither the specific nor the azurophilic granules contained detectable G protein. Based on the ability of exogenous G protein beta/gamma subunits to increase the ADP ribosylation of the cytosolic form of G protein and upon the hydrodynamic behavior of the cytosolic protein, it is likely that this represents an uncomplexed G protein alpha subunit. Proteolytic mapping with Staphylococcus aureus V8 protease suggests the soluble alpha subunit is from Gn, the major pertussis toxin substrate of human neutrophils. Using quantitative analysis, the levels of the 40-kD G protein alpha subunit and of the 35/36-kD beta subunit in the neutrophil membrane were determined.
Journal of Cell Biology - Tập 106 Số 6 - Trang 1927-1936 - 1988
Membrane fusion process of Semliki Forest virus. I: Low pH-induced rearrangement in spike protein quaternary structure precedes virus penetration into cells.The Semliki Forest virus (SFV) directs the synthesis of a heterodimeric membrane protein complex which is used for virus membrane assembly during budding at the surface of the infected cell, as well as for low pH-induced membrane fusion in the endosomes when particles enter new host cells. Existing evidence suggests that the E1 protein subunit carries the fusion potential of the heterodimer, whereas the E2 subunit, or its intracellular precursor p62, is required for binding to the nucleocapsid. We show here that during virus uptake into acidic endosomes the original E2E1 heterodimer is destabilized and the E1 proteins form new oligomers, presumably homooligomers, with altered E1 structure. This altered structure of E1 is specifically recognized by a monoclonal antibody which can also inhibit penetration of SFV into host cells as well as SFV-mediated cell-cell fusion, thus suggesting that the altered E1 structure is important for the membrane fusion. These results give further support for a membrane protein oligomerization-mediated control mechanism for the membrane fusion potential in alphaviruses.
Journal of Cell Biology - Tập 116 Số 2 - Trang 339-348 - 1992
Sự lắp ráp của các khớp nối kiểu kết dính trong tế bào biểu bì do canxi kích thích. Dịch bởi AI Nồng độ canxi ngoại bào đã được chứng minh là kiểm soát sự phân tầng của các tế bào keratinocytes nuôi cấy, có thể thông qua việc điều chỉnh sự hình thành các desmosome. Các nghiên cứu trước đây đã chỉ ra rằng các tế bào keratinocytes nuôi trong môi trường chứa 0.1 mM Ca++ tạo thành các quần thể lỏng lẻo mà không có desmosome. Nếu nồng độ Ca++ được nâng lên 1 mM, các desmosome sẽ được lắp ráp và sự phân phối của các sợi keratin sẽ bị thay đổi. Chúng tôi đã kiểm tra sự phân bố của vinculin và actin trong các tế bào keratinocytes dưới các điều kiện tương tự. Sử dụng kính hiển vi huỳnh quang miễn dịch, chúng tôi cho thấy rằng việc nâng cao [Ca++] trong môi trường làm thay đổi một cách đáng kể sự phân bố của vinculin và actin, dẫn đến sự hình thành các khớp nối kiểu kết dính trong vòng 15 phút sau khi chuyển sang môi trường có nồng độ canxi cao. Các biên của tế bào ở rìa của các quần thể, không gần gũi với các tế bào khác, không bị ảnh hưởng, trong khi các tế bào ở bên trong quần thể tạo ra các khớp nối xung quanh chu vi của mình. Các đĩa gắn kết trong các tế bào keratinocytes được nuôi trong môi trường canxi thấp nằm ở mặt bụng của tế bào, nhưng các khớp nối được hình thành sau khi chuyển sang canxi cao thì không, như được chỉ ra bởi kính hiển vi phản xạ nhiễu xạ. Trong các tế bào được dán nhãn đồng với các kháng thể chống lại vinculin và desmoplakin, các khớp nối kiểu kết dính có chứa vinculin đã hiển thị trước các khớp nối kiểu desmosome khi các tế bào được chuyển sang canxi cao. Mặc dù các cấu trúc mới hình thành chứa vinculin trong các tế bào canxi cao, giống như desmosome, đều đồng vị trí với các cấu trúc có mật độ pha dày, nhưng việc chồng ghép các hình ảnh huỳnh quang video bằng cách sử dụng kính hiển vi huỳnh quang số hóa cho thấy rằng các khớp nối kiểu kết dính và desmosome là các cấu trúc riêng biệt. Các khớp nối kiểu kết dính, giống như các desmosome, có thể đóng vai trò thiết yếu trong việc kiểm soát sự phân tầng của các tế bào keratinocytes.
Journal of Cell Biology - Tập 105 Số 2 - Trang 807-817 - 1987
Phổ quang huỳnh quang vi mô bằng xử lý hình ảnh kỹ thuật số: đo pH tế bào chất. Dịch bởi AI Một giao diện của thiết bị phổ quang huỳnh quang vi mô của chúng tôi với một hệ thống xử lý hình ảnh thực hiện các phép đo phổ quang huỳnh quang vi mô trong các tế bào sống bằng cách xử lý hình ảnh kỹ thuật số. Các tham số quang phổ huỳnh quang có thể được đo bằng cách xử lý hình ảnh kỹ thuật số trực tiếp từ các hình ảnh vi mô của tế bào và được tự động chuẩn hóa cho chiều dài đường đi và thể tích có thể tiếp cận. Do đó, một "bản đồ" tế bào chất chính xác của các tham số quang phổ khác nhau có thể được tạo ra. Giá trị pH tế bào chất ở trạng thái nghỉ của tế bào nguyên bào (tế bào 3T3) đã được xác định bằng cách đo tỷ lệ huỳnh quang fluorescein được kích thích bởi hai bước sóng liên tiếp (489 và 452 nm). Dextran được gắn fluorescein tiêm vào tế bào được sử dụng làm chỉ số pH, vì nó bị kẹt trong tế bào chất nhưng không được vào nhân và các bào quan khác. Giá trị pH trung bình trong tế bào chất là 6.83 (+/- 0.38). Tuy nhiên, pH tế bào chất thể hiện một phân bố không đơn điệu, với giá trị pH trung bình thấp hơn là 6.74 (+/- 0.23). Khi tế bào 3T3 hấp thụ môi trường chứa dextran fluorescein, các pinosome ở ngoại vi nhân có pH thấp hơn so với những pinosome gần hơn với mép gấp nếp của tế bào. Hệ thống xử lý hình ảnh hiện tại được phân tích về độ tuyến tính của phát hiện, hiện tượng tán xạ ánh sáng, tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu, đường chuẩn, và độ phân giải không gian. Các kết quả thu được từ phân tích hình ảnh kỹ thuật số được chứng minh là có thể so sánh với các kết quả từ phổ quang huỳnh quang vi mô tiêu chuẩn. Chúng tôi cũng thảo luận về một số ứng dụng khác của kỹ thuật hình ảnh tỷ lệ này trong sinh học tế bào.
Journal of Cell Biology - Tập 98 Số 2 - Trang 717-724 - 1984
TGF-beta 2 và NGF do tế bào sao phát sinh khác nhau điều chỉnh sự biểu hiện của các phân tử nhận diện thần kinh bởi tế bào sao nuôi cấy. Dịch bởi AI Vì sự quan trọng của các phân tử nhận diện thần kinh do tế bào glia biểu hiện trong việc trung gian các tương tác với tế bào thần kinh, các yếu tố tăng trưởng và cytokine được biết đến có chức năng trong quá trình hình thành mô và trong các bệnh lý của hệ thần kinh đã được nghiên cứu về tác động của chúng đối với sự biểu hiện các phân tử nhận diện bởi các tế bào sao chưa trưởng thành và trưởng thành từ nhiều vùng não khác nhau. Trong các nuôi cấy tế bào sao chưa trưởng thành, các yếu tố chuyển hóa tăng trưởng-beta 1 (TGF-beta 1) và -beta 2 (TGF-beta 2) cùng với yếu tố tăng trưởng thần kinh (NGF) đã làm tăng sự biểu hiện của phân tử bám dính thần kinh L1, dẫn đến sự gia tăng đặc hiệu do glia điều hòa L1 trong quá trình mọc nhánh của các tế bào thần kinh hạch rễ lưng trên nền tế bào sao. Sự biểu hiện L1 do TGF-beta kích thích đã bị ngăn chặn khi bổ sung kháng thể chống lại NGF, cho thấy rằng TGF-beta ảnh hưởng đến sự biểu hiện L1 bằng cách điều chỉnh sản xuất NGF bởi các tế bào sao. TGF-beta 1 và -beta 2 đã làm giảm sự biểu hiện của N-CAM ở tế bào sao chưa trưởng thành. Vì sự biểu hiện N-CAM không bị ảnh hưởng bởi NGF và các kháng thể chống lại NGF không làm giảm đi sự giảm biểu hiện N-CAM do TGF-beta gây ra, NGF có vẻ không phải là chất trung gian điều tiết sự biểu hiện của N-CAM. Sự biểu hiện của phân tử bám dính trên tế bào glia (AMOG) không bị ảnh hưởng bởi bất kỳ yếu tố nào. NGF và TGF-beta 2 ở dạng tiềm tàng, nhưng không có TGF-beta 1, được tìm thấy trong dịch nuôi cấy. Việc bổ sung interferon-gamma (IFN-gamma), interleukin-1 beta (IL-1 beta), interleukin-6 (IL-6), yếu tố tăng trưởng xuất phát từ tiểu cầu (PDGF) hoặc yếu tố tăng trưởng nguyên bào sợi cơ bản (bFGF) vào các nuôi cấy không làm thay đổi sự biểu hiện các phân tử nhận diện. Sự biểu hiện các phân tử nhận diện bởi các tế bào sao trưởng thành không được tìm thấy bị biến đổi bởi bất kỳ yếu tố nào đã được thử nghiệm. Với sự quan sát rằng mức độ biểu hiện L1 và N-CAM tương quan với sự hiện diện của TGF-beta 2 và NGF trong dịch nuôi cấy của các tế bào sao chưa trưởng thành, một cơ chế điều chỉnh tự nội tại cho sự biểu hiện các phân tử nhận diện bởi các tế bào này được gợi ý là đóng vai trò quan trọng trong việc điều chỉnh các tương tác giữa tế bào thần kinh và tế bào glia.
Journal of Cell Biology - Tập 115 Số 2 - Trang 473-484 - 1991
Tổng số: 1,616
- 1
- 2
- 3
- 4
- 5
- 6
- 10