Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Hình ảnh hóa và định lượng nhanh chóng việc đánh dấu bằng autoradiographic trong kính hiển vi điện tử quét áp dụng để xác định vị trí thụ thể trên bề mặt của toàn bộ tế bào
Tóm tắt
Việc sử dụng hình ảnh điện tử phản xạ (BEI) như một quy trình thường quy để kiểm tra các phản ứng autoradiographic trong kính hiển vi điện tử quét (SEM) được mô tả. Kỹ thuật này cho phép xác định số lượng vị trí thụ thể được chiếm bởi 125I yếu tố tăng trưởng biểu bì (EGF) trên toàn bộ tế bào. Các tác động của 1,25 dihydroxyvitamin D3 (1,25 (OH)2D3) lên số lượng thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì (EGF-R) trong dòng tế bào ung thư vú người BT 20 (được biết là sở hữu số lượng EGFR rất cao) đã được đánh giá bằng phương pháp này. Để so sánh mật độ hạt bạc trên các tế bào (các mẫu đối chứng và các tế bào được điều trị bằng 1,25 (OH)2D3), chúng tôi đã sử dụng một hệ thống phân tích hình ảnh Quantimet 900. Các kết quả đã được so sánh với những nghiên cứu trước đó sử dụng kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM). Nghiên cứu này đã xác nhận các kết quả thu được với TEM và cho thấy sự phân bố đồng đều của các vị trí thụ thể trên một tế bào đơn lẻ cùng với sự khác biệt lớn về số lượng vị trí thụ thể giữa các tế bào khác nhau. Việc sử dụng BEI để hình dung phản ứng autoradiographic trong SEM cho phép kiểm tra một bề mặt lớn với độ tương phản và độ phân giải tốt, đồng thời loại bỏ các hiện vật không tương ứng với hạt bạc. Nó đã cung cấp thông tin mới mà phương pháp autoradiography TEM định lượng không cung cấp và dễ sử dụng hơn cũng như nhanh hơn. Việc sử dụng hiệu quả kính hiển vi điện tử quét autoradiography kết hợp với BEI có thể tạo điều kiện cho việc lập bản đồ phân bố diện tích toàn bộ của nhãn phóng xạ.
Từ khóa
#hình ảnh điện tử phản xạ #autoradiography #yếu tố tăng trưởng biểu bì #kính hiển vi điện tử quét #thụ thể #tế bào ung thư vúTài liệu tham khảo
Cau P (1990) Microscopie quantitative -Stéréologie-Autoradiographie et immunocytochimie quantitative. Editions INSERM, Paris
De Harven E, Leung R, Christensen H (1984) A novel approach for scanning electron microscopy of colloidal gold-labeled cell surfaces. J Cell Biol 99:53–57
Falette N, Frappart L, Lefebvre MF, Saez S (1989) Increased Epidermal Growth Factor Receptor level in breast cancer cells treated by 1,25 dihydroxyvitamin D3. Mol Cellul Endocrinol 184:329–341
Fitzpatrick SL, La Chance MP, Shultz GS (1984) Characterization of epidermal growth factor receptor and action on human breast cancer cells in culture. Cancer Res 44:3442–3447
Fracker P, Speck JJ (1978) Protein and cell membrane iodinations with a sparingly soluble chloramide 1, 3, 4, 6 tetrachloro 3 a, 6 a diphenyl glycolurie. Biochem Biophys Res Commun 80:849–857
Frappart L, Falette N, Lefebvre MF, Bremond A, Vauzelle JL, Saez S (1989a) In vitro study of effects of 1,25 dihydroxyvitamin D3 on the morphology of human breast cancer cell line BT.20. Differentation 40:63–69
Frappart L, Lefebvre MF, Saez S (1989b) The effect of 1,25 dihydroxyvitamin D3 on binding and internalization of epidermal growth factor in cultured cells. Exp Cell Res 184:329–341
Hodges GM, Muir MD (1974) Autoradiography of biological tissues in the scanning electron microscope. Nature 247:383–385
Hodges GM, Muir MD (1976) Scanning electron microscope autoradiography. In: Principles and techniques of scanning electron microscopy, vol. 5. Hayat MA (ed) Van Nostrand Reinhold Company, New York/Cincinati, pp 78
Horwitz KB, Zava DT, Thilagar A, Jensen EM, McGuire WL (1978) Steroid receptor analysis of nine human breast cancer cell lines. Cancer Res 38:2434–2437
Junger E, Bachmann L (1980) Methodological basis for an autoradiographic demonstration of insulin receptor sites on the surface of whole cells a study using light and scanning electron microscopy. J Microsc 119:199–211
Larra F, Droz B (1970) Techniques radioautographiques et leur application à l’etude du renouvellement des constituants cellulaires. J Microsc 9:845–848
Lasfargues EY, Ozzello L (1958) Cultivation of human breast carcinomas. J Natl Cancer Inst 21:1131–1147
Lebeau J, Goubin G (1987) Amplification of the epidermal growth factor receptor gene in the BT 20 breast carcinoma cell line. Int J Cancer 40:189–191
Molday RS, Maher P (1980) A review of cell surface markers and labelling techniques for scanning electron microscopy. J Histochem 12:273–315
Nanci A, Zalzal S, Smith CE (1990) Routine use of backscattered electron imaging to visualize cytochemical and autoradiographic reactions in semithin plastic sections. J Histochem Cytochem 38:403–444
Salpeter MM (1969) Electron microscope autoradiography as a quantitative tool in enzyme cytochemistry. II. J. Cell Biol 42:122–134
Savage CR, Inagami R, Cohen S (1972) The primary structure of epidermal growth factor. J Biol Chem 247:7612–7621
Stevens AR (1966) High resolution autoradiography. In: Prescott D (ed) Methods in cell physiology, 2. Academic Press, New York London, pp 255–265