VEGF-A165 Kích Thích Mạnh Mẽ Sự Tăng Sinh, Angiogenesis và Chữa Lành Vết Thương Của Tế Bào Nội Mạch Rào Cản Máu – Thần Kinh Ở Người Trong Môi Trường Nuôi Cấy In Vitro

Springer Science and Business Media LLC - Tập 33 - Trang 789-801 - 2013
Chetan Lakshmana Reddy1, Nejla Yosef1,2, Eroboghene E. Ubogu1
1Neuromuscular Immunopathology Research Laboratory, Department of Neurology, Baylor College of Medicine, Houston, USA
2Department of Molecular Physiology and Biophysics, Baylor College of Medicine, Houston, USA

Tóm tắt

Nhiều yếu tố tăng sinh như yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu (VEGF) đã được xác định liên quan đến sự tăng sinh và phục hồi mạch máu ở động vật có vú. Tuy nhiên, các yếu tố trung gian phân tử của quá trình phát triển và đặc trưng hóa rào cản máu-thần kinh (BNB) ở người vẫn chưa được biết đến. Các tế bào nội mạch thần kinh người (pHEndECs) được nuôi cấy tăng sinh trong ống nghiệm và các thụ thể yếu tố tăng sinh đặc hiệu được phát hiện bằng phương pháp western blot. pHEndECs được nuôi cấy với môi trường cơ bản chứa các nồng độ yếu tố tăng trưởng khác nhau có hoặc không có heparin. Sự phát triển tế bào không phóng xạ, angiogenesis do Matrigel ™ gây ra và các thử nghiệm chữa lành vết thương bằng ống tiêm vô trùng đã được thực hiện. Tỷ lệ tăng sinh, số lượng và chiều dài tổng cộng của các mạch máu nhỏ được hình thành, cũng như tỷ lệ chữa lành vết thương của lớp đơn tế bào nội mạch được xác định và so sánh với các điều kiện cơ bản. VEGF-A165 có mặt heparin là chất kích thích mạnh nhất sự tăng sinh, angiogenesis và chữa lành vết thương của pHEndEC trong ống nghiệm. 1.31 nM VEGF-A165 đã gây ra sự gia tăng khoảng 110% trong sự phát triển tế bào so với các điều kiện cơ bản (∼51% không có heparin). 2.62 pM VEGF-A165 đã tạo ra sự gia tăng gấp ba lần về số lượng trung bình của các mạch máu nhỏ và gia tăng gấp 3.9 lần về chiều dài mao mạch tổng cộng/ trường so với các điều kiện cơ bản. Thêm vào đó, 0.26 nM VEGF-A165 đã kích thích tốc độ chữa lành vết thương của nội mạch trung bình tăng thêm khoảng 1.3 lần sau 4–18 giờ kể từ khi tổn thương lớp đơn tế bào nội mạch, được trung gian bởi sự gia tăng di chuyển tế bào. VEGF-A165 là yếu tố tăng sinh duy nhất có khả năng đóng kín hoàn toàn vết thương, xảy ra trong vòng 30 giờ sau khi bị tổn thương nhờ sự gia tăng sự phát triển tế bào. Nghiên cứu này cho thấy VEGF-A165, dưới sự có mặt của heparin, là một chất kích thích mạnh mẽ cho sự tăng sinh, angiogenesis và chữa lành vết thương của pHEndEC trong ống nghiệm. VEGF-A165 có thể là một yếu tố tăng sinh quan trọng cần thiết cho sự phát triển và phục hồi của rào cản máu thần kinh ở người nhằm đáp ứng với tổn thương thần kinh ngoại biên.

Từ khóa

#VEGF-A165 #yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu #tế bào nội mạch thần kinh #chữa lành vết thương #angiogenesis

Tài liệu tham khảo

Abe M, Sano Y, Maeda T, Shimizu F, Kashiwamura Y, Haruki H, Saito K, Tasaki A, Kawai M, Terasaki T, Kanda T (2012) Establishment and characterization of human peripheral nerve microvascular endothelial cell lines: a new in vitro blood-nerve barrier (BNB) model. Cell Struct Funct 37(2):89–100 Aird W (2007a) Phenotypic heterogeneity of the endothelium: I. structure, function, and mechanisms. Circ Res 100(2):158–173 Aird W (2007b) Phenotypic heterogeneity of the endothelium: II. Representative vascular beds. Circ Res 100(2):174–190 Al Ahmad A, Gassmann M, Ogunshola O (2009) Maintaining blood-brain barrier integrity: pericytes perform better than astrocytes during prolonged oxygen deprivation. J Cell Physiol 218(3):612–622. doi:10.1002/jcp.21638 Allt G, Lawrenson J (2000) The blood-nerve barrier: enzymes, transporters and receptors–a comparison with the blood-brain barrier. Brain Res Bull 52(1):1–12 Arai K, Jin G, Navaratna D, Lo E (2009) Brain angiogenesis in developmental and pathological processes: neurovascular injury and angiogenic recovery after stroke. FEBS J 276(17):4644–4652. doi:10.1111/j.1742-4658.2009.07176.x Ashikari-Hada S, Habuchi H, Kariya Y, Kimata K (2005) Heparin regulates vascular endothelial growth factor165-dependent mitogenic activity, tube formation, and its receptor phosphorylation of human endothelial cells. Comparison of the effects of heparin and modified heparins. J Biol Chem 280(36):31508–31515. doi:10.1074/jbc.M414581200 Bell M, Weddell A (1984a) A descriptive study of the blood vessels of the sciatic nerve in the rat, man and other mammals. Brain 107(Pt 3):871–898 Bell M, Weddell A (1984b) A morphometric study of intrafascicular vessels of mammalian sciatic nerve. Muscle Nerve 7(7):524–534 Bendfeldt K, Radojevic V, Kapfhammer J, Nitsch C (2007) Basic fibroblast growth factor modulates density of blood vessels and preserves tight junctions in organotypic cortical cultures of mice: a new in vitro model of the blood-brain barrier. J Neurosci 27(12):3260–3267. doi:10.1523/JNEUROSCI.4033-06.2007 Engelhardt B, Ransohoff R (2005) The ins and outs of T-lymphocyte trafficking to the CNS: anatomical sites and molecular mechanisms. Trends Immunol 26(9):485–495 Förster C, Silwedel C, Golenhofen N, Burek M, Kietz S, Mankertz J, Drenckhahn D (2005) Occludin as direct target for glucocorticoid-induced improvement of blood-brain barrier properties in a murine in vitro system. J Physiol 565(Pt 2):475–486. doi:10.1113/jphysiol.2005.084038 Galvan V, Greenberg D, Jin K (2006) The role of vascular endothelial growth factor in neurogenesis in adult brain. Mini Rev Med Chem 6(6):667–669 Garcia C, Darland D, Massingham L, D’Amore P (2004) Endothelial cell-astrocyte interactions and TGF beta are required for induction of blood-neural barrier properties. Brain Res Dev Brain Res 152(1):25–38. doi:10.1016/j.devbrainres.2004.05.008 Guo S, Lo E (2009) Dysfunctional cell–cell signaling in the neurovascular unit as a paradigm for central nervous system disease. Stroke 40(3 Suppl):S4–S7. doi:10.1161/STROKEAHA.108.534388 Hirakawa H, Okajima S, Nagaoka T, Takamatsu T, Oyamada M (2003) Loss and recovery of the blood-nerve barrier in the rat sciatic nerve after crush injury are associated with expression of intercellular junctional proteins. Exp Cell Res 284(2):196–210 Kanda T, Numata Y, Mizusawa H (2004) Chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy: decreased claudin-5 and relocated ZO-1. J Neurol Neurosurg Psychiatry 75(5):765–769 Kashiwamura Y, Sano Y, Abe M, Shimizu F, Haruki H, Maeda T, Kawai M, Kanda T (2011) Hydrocortisone enhances the function of the blood-nerve barrier through the up-regulation of claudin-5. Neurochem Res 36(5):849–855. doi:10.1007/s11064-011-0413-6 Krizanac-Bengez L, Mayberg M, Janigro D (2004) The cerebral vasculature as a therapeutic target for neurological disorders and the role of shear stress in vascular homeostatis and pathophysiology. Neurol Res 26(8):846–853 Latker C, Shinowara N, Miller J, Rapoport S (1987) Differential localization of alkaline phosphatase in barrier tissues of the frog and rat nervous systems: a cytochemical and biochemical study. J Comp Neurol 264(3):291–302 Lee J, Kay E (2006) FGF-2-induced wound healing in corneal endothelial cells requires Cdc42 activation and Rho inactivation through the phosphatidylinositol 3-kinase pathway. Invest Ophthalmol Vis Sci 47(4):1376–1386. doi:10.1167/iovs.05-1223 Lee JH, Lee H, Joung YK, Jung KH, Choi JH, Lee DH, Park KD, Hong SS (2011) The use of low molecular weight heparin–pluronic nanogels to impede liver fibrosis by inhibition the TGF-beta/Smad signaling pathway. Biomaterials 32(5):1438–1445. doi:10.1016/j.biomaterials.2010.10.023 Malmgren L, Olsson Y (1980) Differences between the peripheral and the central nervous system in permeability to sodium fluorescein. J Comp Neurol 191(1):103–107. doi:10.1002/cne.901910106 Man S, Ubogu E, Ransohoff R (2007) Inflammatory cell migration into the central nervous system: a few new twists on an old tale. Brain Pathol 17(2):243–250 Man S, Ubogu E, Williams K, Tucky B, Callahan M, Ransohoff R (2008) Human brain microvascular endothelial cells and umbilical vein endothelial cells differentially facilitate leukocyte recruitment and utilize chemokines for T cell migration. Clin Dev Immunol 2008:384982 Marchi N, Teng Q, Ghosh C, Fan Q, Nguyen M, Desai N, Bawa H, Rasmussen P, Masaryk T, Janigro D (2010) Blood-brain barrier damage, but not parenchymal white blood cells, is a hallmark of seizure activity. Brain Res 1353:176–186. doi:10.1016/j.brainres.2010.06.051 McCaffrey TA, Falcone DJ, Brayton CF, Agarwal LA, Welt FG, Weksler BB (1989) Transforming growth factor-beta activity is potentiated by heparin via dissociation of the transforming growth factor-beta/alpha 2-macroglobulin inactive complex. J Cell Biol 109(1):441–448 McCaffrey TA, Falcone DJ, Du B (1992) Transforming growth factor-beta 1 is a heparin-binding protein: identification of putative heparin-binding regions and isolation of heparins with varying affinity for TGF-beta 1. J Cell Physiol 152(2):430–440. doi:10.1002/jcp.1041520226 Mu E, Ding R, An X, Li X, Chen S, Ma X (2012) Heparin attenuates lipopolysaccharide-induced acute lung injury by inhibiting nitric oxide synthase and TGF-beta/Smad signaling pathway. Thromb Res 129(4):479–485. doi:10.1016/j.thromres.2011.10.003 Murphy H, Bakopoulos N, Dame M, Varani J, Ward P (1998) Heterogeneity of vascular endothelial cells: differences in susceptibility to neutrophil-mediated injury. Microvasc Res 56(3):203–211. doi:10.1006/mvre.1998.2110 Olsson Y (1971) Studies on vascular permeability in peripheral nerves. IV. Distribution of intravenously injected protein tracers in the peripheral nervous system of various species. Acta Neuropathol 17(2):114–126 Olsson Y (1990) Microenvironment of the peripheral nervous system under normal and pathological conditions. Crit Rev Neurobiol 5(3):265–311 Orte C, Lawrenson J, Finn T, Reid A, Allt G (1999) A comparison of blood-brain barrier and blood-nerve barrier endothelial cell markers. Anat Embryol (Berl) 199(6):509–517 Poduslo J, Curran G, Dyck P (1988) Increase in albumin, IgG, and IgM blood-nerve barrier indices in human diabetic neuropathy. Proc Natl Acad Sci USA 85(13):4879–4883 Poduslo J, Curran G, Berg C (1994) Macromolecular permeability across the blood-nerve and blood-brain barriers. Proc Natl Acad Sci USA 91(12):5705–5709 Pola R, Aprahamian TR, Bosch-Marce M, Curry C, Gaetani E, Flex A, Smith RC, Isner JM, Losordo DW (2004) Age-dependent VEGF expression and intraneural neovascularization during regeneration of peripheral nerves. Neurobiol Aging 25(10):1361–1368. doi:10.1016/j.neurobiolaging.2004.02.028 Pummi K, Heape A, Grénman R, Peltonen J, Peltonen S (2004) Tight junction proteins ZO-1, occludin, and claudins in developing and adult human perineurium. J Histochem Cytochem 52(8):1037–1046 Reina M, López A, Villanueva M, de Andrés J, León G (2000) Morphology of peripheral nerves, their sheaths, and their vascularization. Rev Esp Anestesiol Reanim 47(10):464–475 Reina M, López A, Villanueva M, De Andrés J, Machés F (2003) The blood-nerve barrier in peripheral nerves. Rev Esp Anestesiol Reanim 50(2):80–86 Rider CC (2006) Heparin/heparan sulphate binding in the TGF-beta cytokine superfamily. Biochem Soc Trans 34(Pt 3):458–460. doi:10.1042/BST0340458 Ropper AH, Gorson KC, Gooch CL, Weinberg DH, Pieczek A, Ware JH, Kershen J, Rogers A, Simovic D, Schratzberger P, Kirchmair R, Losordo D (2009) Vascular endothelial growth factor gene transfer for diabetic polyneuropathy: a randomized, double-blinded trial. Ann Neurol 65(4):386–393. doi:10.1002/ana.21675 Roskoski R Jr (2007) Vascular endothelial growth factor (VEGF) signaling in tumor progression. Crit Rev Oncol Hematol 62(3):179–213. doi:10.1016/j.critrevonc.2007.01.006 Sadowska G, Malaeb S, Stonestreet B (2010) Maternal glucocorticoid exposure alters tight junction protein expression in the brain of fetal sheep. Am J Physiol Heart Circ Physiol 298(1):H179–H188. doi:10.1152/ajpheart.00828.2009 Sano Y, Shimizu F, Nakayama H, Abe M, Maeda T, Ohtsuki S, Terasaki T, Obinata M, Ueda M, Takahashi R, Kanda T (2007) Endothelial cells constituting blood-nerve barrier have highly specialized characteristics as barrier-forming cells. Cell Struct Funct 32(2):139–147 Schlessinger J (2004) Common and distinct elements in cellular signaling via EGF and FGF receptors. Science 306(5701):1506–1507. doi:10.1126/science.1105396 Schratzberger P, Walter DH, Rittig K, Bahlmann FH, Pola R, Curry C, Silver M, Krainin JG, Weinberg DH, Ropper AH, Isner JM (2001) Reversal of experimental diabetic neuropathy by VEGF gene transfer. J Clin Invest 107(9):1083–1092. doi:10.1172/JCI12188 Shabb J (2001) Physiological substrates of cAMP-dependent protein kinase. Chem Rev 101(8):2381–2411 Shibuya M (2008) Vascular endothelial growth factor-dependent and -independent regulation of angiogenesis. BMB Rep 41(4):278–286 Shibuya M (2009) Brain angiogenesis in developmental and pathological processes: therapeutic aspects of vascular endothelial growth factor. FEBS J 276(17):4636–4643. doi:10.1111/j.1742-4658.2009.07175.x Shimizu F, Sano Y, Abe MA, Maeda T, Ohtsuki S, Terasaki T, Kanda T (2011a) Peripheral nerve pericytes modify the blood-nerve barrier function and tight junctional molecules through the secretion of various soluble factors. J Cell Physiol 226(1):255–266. doi:10.1002/jcp.22337 Shimizu F, Sano Y, Haruki H, Kanda T (2011b) Advanced glycation end-products induce basement membrane hypertrophy in endoneurial microvessels and disrupt the blood-nerve barrier by stimulating the release of TGF-beta and vascular endothelial growth factor (VEGF) by pericytes. Diabetologia 54(6):1517–1526. doi:10.1007/s00125-011-2107-7 Shimizu F, Sano Y, Saito K, Abe MA, Maeda T, Haruki H, Kanda T (2012) Pericyte-derived glial cell line-derived neurotrophic factor increase the expression of claudin-5 in the blood-brain barrier and the blood-nerve barrier. Neurochem Res 37(2):401–409. doi:10.1007/s11064-011-0626-8 Smith C, Atchabahian A, Mackinnon S, Hunter D (2001) Development of the blood-nerve barrier in neonatal rats. Microsurgery 21(7):290–297 Sobue K, Yamamoto N, Yoneda K, Hodgson M, Yamashiro K, Tsuruoka N, Tsuda T, Katsuya H, Miura Y, Asai K, Kato T (1999) Induction of blood-brain barrier properties in immortalized bovine brain endothelial cells by astrocytic factors. Neurosci Res 35(2):155–164 Stonestreet B, Sadowska G, McKnight A, Patlak C, Petersson K (2000) Exogenous and endogenous corticosteroids modulate blood-brain barrier development in the ovine fetus. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 279(2):R468–R477 Sun Y, Jin K, Xie L, Childs J, Mao X, Logvinova A, Greenberg D (2003) VEGF-induced neuroprotection, neurogenesis, and angiogenesis after focal cerebral ischemia. J Clin Invest 111(12):1843–1851. doi:10.1172/JCI17977 Takahashi M (2001) The GDNF/RET signaling pathway and human diseases. Cytokine Growth Factor Rev 12(4):361–373 Tang J, Wang J, Kong X, Yang J, Guo L, Zheng F, Zhang L, Huang Y, Wan Y (2009) Vascular endothelial growth factor promotes cardiac stem cell migration via the PI3 K/Akt pathway. Exp Cell Res 315(20):3521–3531. doi:10.1016/j.yexcr.2009.09.026 Utsumi H, Chiba H, Kamimura Y, Osanai M, Igarashi Y, Tobioka H, Mori M, Sawada N (2000) Expression of GFRalpha-1, receptor for GDNF, in rat brain capillary during postnatal development of the BBB. Am J Physiol Cell Physiol 279(2):C361–C368 Wakefield L, Roberts A (2002) TGF-beta signaling: positive and negative effects on tumorigenesis. Curr Opin Genet Dev 12(1):22–29 Wang Y, Jin K, Mao X, Xie L, Banwait S, Marti H, Greenberg D (2007) VEGF-overexpressing transgenic mice show enhanced post-ischemic neurogenesis and neuromigration. J Neurosci Res 85(4):740–747. doi:10.1002/jnr.21169 Weidenfeller C, Schrot S, Zozulya A, Galla H (2005) Murine brain capillary endothelial cells exhibit improved barrier properties under the influence of hydrocortisone. Brain Res 1053(1–2):162–174 Yano K, Gale D, Massberg S, Cheruvu P, Monahan-Earley R, Morgan E, Haig D, von Andrian U, Dvorak A, Aird W (2007) Phenotypic heterogeneity is an evolutionarily conserved feature of the endothelium. Blood 109(2):613–615 Yosef N, Ubogu EE (2012) GDNF restores human blood-nerve barrier function via RET tyrosine kinase-mediated cytoskeletal reorganization. Microvasc Res 83(3):298–310. doi:10.1016/j.mvr.2012.01.005 Yosef N, Ubogu EE (2013) An immortalized human blood-nerve barrier endothelial cell line for in vitro permeability studies. Cell Mol Neurobiol 33(2):175–186. doi:10.1007/s10571-012-9882-7 Yosef N, Xia R, Ubogu E (2010) Development and characterization of a novel human in vitro blood-nerve barrier model using primary endoneurial endothelial cells. J Neuropathol Exp Neurol 69(1):82–97 Zheng Z, Yenari M (2004) Post-ischemic inflammation: molecular mechanisms and therapeutic implications. Neurol Res 26(8):884–892