Phát hiện cấu trúc siêu vi mô của bromodeoxyuridine (BUdR) được tích hợp DNA trong mô não được nhúng trong nhựa

Springer Science and Business Media LLC - Tập 95 - Trang 491-494 - 1991
A. Migheli1, C. Mocellini1, M. T. Giordana1
1Clinica Neurologica II, Università di Torino, Torino, Italy

Tóm tắt

Chúng tôi mô tả một giao thức để phát hiện cấu trúc siêu vi mô của bromodeoxyuridine (BUdR) được tích hợp DNA trong mô được nhúng trong nhựa bằng phương pháp gán nhãn miễn dịch vàng sau khi nhúng. Khu vực quanh não thất của não phôi chuột được cắt, cố định bằng paraformaldehyde hoặc glutaraldehyde, và nhúng trong LR White. Việc gán nhãn vàng BUdR chỉ được tìm thấy khi các lát mỏng được xử lý trước bằng 4 N HCl. Các tác nhân biến tính DNA khác, chẳng hạn như Na ethoxide, formamide, axit formic, nhiệt độ hoặc HCl ở nồng độ thấp hơn đều không hiệu quả. Rất ít sự khác biệt về mức độ gán nhãn được phát hiện tùy thuộc vào phương pháp cố định. Phương pháp này có thể được áp dụng để điều tra cấu trúc tinh vi của các tế bào đang tái bản trong các điều kiện in vivo khác, chẳng hạn như khối u ở người.

Từ khóa

#BUdR #DNA #phát hiện cấu trúc siêu vi mô #mô não #gán nhãn miễn dịch vàng

Tài liệu tham khảo

Apte SS, Puddle B (1990) Bromodeoxyuridine (BrdUrd) immunohistochemistry in undecalcified plastic-embedded tissue. Elimination of the DNA denaturation step. Histochemistry 93:631–635

Gratzner HG (1982) Monoclonal antibody to 5-bromo and 5-iododeoxyuridine: a new reagent for detection of DNA replication. Science 218:474–475

Harms G, Goor H van, Koudstaal J, Ley L de, Hardonk MJ (1986) Immunohistochemical demonstration of DNA-incorporated 5-bromodeoxyuridine in frozen and plastic embedded sections. Histochemistry 85:139–143

Hayashi Y, Koike M, Matsutani M, Hoshino T (1988) Effects of fixation time and enzymatic digestion on immunohistochemical demonstration of bromodeoxyuridine in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue. J Histochem Cytochem 36:511–514

Hoshino T, Prados M, Wilson CB, Cho Kg, Lee K-S, Davis RL (1989) Prognostic implications of the bromodeoxyuridine labeling index of human gliomas. J Neurosurg 71:335–341

Magaud J-P, Sargent I, Clarke PJ, Ffrench M, Rimokh R, Mason DY (1989) Double immunocytochemical labeling of cell and tissue samples with monoclonal anti-bromodeoxyuridine. J Histochem Cytochem 37:1517–1527

Mazzotti G, Rizzoli R, Galanzi A, Papa S, Vitale M, Falconi M, Neri LM, Zini N, Maraldi NM (1990) High-resolution detection of newly synthesized DNA by anti-bromodeoxyuridine antibodies identifies specific chromatin domains. J Histochem Cytochem 38:13–22

Meyer JS, Nauert J, Koehm S, Hughes J (1989) Cell kinetics of human tumors by in vitro bromodeoxyuridine labeling. J Histochem Cytochem 37:1449–1454

Moran R, Darzynkiewicz Z, Staiano-Coico L, Melamed MR (1985) Detection of 5-bromodeoxyuridine (BrdUrd) incorporation by monoclonal antibodies: role of the DNA denaturation step. J Histochem Cytochem 33:821–827

Newman GR, Jasani B, Williams ED (1983) A simple post-embedding system for the rapid demonstration of tissue antigens under the electron microscope. Histochem J 15:543–555

Schutte B, Reynders MMJ, Bosman FT, Blijham GH (1987) Effect of tissue fixation on anti-bromodeoxyuridine immunohistochemistry. J Histochem Cytochem 35:1343–1345

Thiry M, Dombrowicz D (1988) Anti-bromodeoxyuridine monoclonal antibody: an alternative tool for the identification of replicated DNA at the electron microscope level. Biol Cell 62:99–102

Vogel W, Mehnert K, Pentz S (1990) Demonstration of chromosome replication by BrdU antibody technique and electron microscopy. Hum Genet 84:237–240

Thông tin
Thông tin xuất bản

Springer Science and Business Media LLC

Tập 95

491-494

Thông tin tác giả