Phát triển phương pháp chuẩn bị các nền văn hóa tế bào biểu mô ruột của chuột
Tóm tắt
Chúng tôi mô tả một phương pháp có thể tái lập để nuôi cấy biểu mô ruột non (xuất phát từ ruột của chuột con) trong các nền văn hóa ngắn hạn (sơ cấp). Các điều kiện nuôi cấy tối ưu được xác định thông qua các thử nghiệm định lượng về sự sinh sản (tức là sự thay đổi trong số lượng tế bào và tổng hợp DNA). Việc tách biệt biểu mô và, đáng lưu ý, việc bảo tồn tính toàn vẹn ba chiều của nó được thực hiện bằng cách sử dụng kỹ thuật tiêu hóa collagenase/dispase. Sự tinh khiết của biểu mô cũng được tăng cường nhờ vào phương pháp lắng phân biệt đơn giản.
Các kết quả được trình bày dưới đây ủng hộ ý tưởng rằng sự sinh sản của biểu mô ruột bình thường ex vivo phụ thuộc ban đầu vào việc duy trì tính toàn vẹn cấu trúc của mô này và vào các yếu tố được sản xuất bởi các tế bào trung mô không đồng nhất. Sự sinh sản trong ống nghiệm cũng phụ thuộc quan trọng vào chất lượng của môi trường và các thành phần sử dụng.
Các nền văn hóa đạt được độ bão hòa trong vòng 10–14 ngày và bao gồm các thuộc địa biểu mô cùng với các lượng tế bào giống như cơ trơn khác nhau. Các nền văn hóa đã được duy trì trong thời gian lên tới một tháng, nhưng tiềm năng phát triển lâu dài của việc nhân giống chưa được kiểm tra. Các chiến lược để giảm sự sinh sản của các tế bào không phải biểu mô này cũng được mô tả.
Từ khóa
Tài liệu tham khảo
Barcellos-Hoff, 1989, Mammary Epithelial Cells as a Model for Studies of the Regulation of Gene Expression, In Functional Epithelial Cells In Culture, 363
Barclay, 1981, The localisation of populations of lymphocytes defined by monoclonal antibodies in rat lymphoid tissues, Immunology, 42, 593
Blay, 1984, Characterisation of an epithelioid cell line derived from rat small intestine: Demonstration of cytokeratin filaments, Cell Biol. Int. Rep, 8, 551, 10.1016/0309-1651(84)90054-7
Brasaemle, 1988, MicroELISA reader quantification of fixed, stained, solubilised cells in microtitre dishes, Biotechniques, 6, 418
Chopra, 1981, Long term culture of epithelial cells form the normal rat colon, In Vitro, 17, 441, 10.1007/BF02626745
Debus, 1983, Monoclonal antibodies to desmin, the muscle-specific intermediate filament protein, EMBO J, 2, 2305, 10.1002/j.1460-2075.1983.tb01738.x
Evans, 1981, Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos, Nature, 292, 154, 10.1038/292154a0
Finch, 1989, Human KGF is FGF-related with properties of a paracrine effector of epithelial cell growth, Science, 245, 752, 10.1126/science.2475908
Flint, 1991, A low temperature method for the isolation of small intestinal epithelium along the crypt-villus axis, Biochem. J, 280, 331, 10.1042/bj2800331
Franke, 1978, Antibody to prekeratin. Decoration of tonofilament like arrays in various cells of epithelial character, Expl Cell Res, 116, 429, 10.1016/0014-4827(78)90466-4
Freshney, 1978, Cultures of animal cells, A Manual of Basic Technique
Gibson, 1989, Isolation of colonic crypts that maintain structural and metabolic viability in vitro, Gastroenterology, 96, 283, 10.1016/0016-5085(89)91549-7
Gospadarowicz, 1980, Permissive effect of the extracellular matrix on cell proliferation in vitro, Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A, 77, 4094, 10.1073/pnas.77.7.4094
Hedman, 1979, Isolation of the pericellular matrix of human fibroblast cultures, J. Cell Biol, 81, 83, 10.1083/jcb.81.1.83
Kédinger, 1987, Intestinal tissue and cell cultures, Differentiation, 36, 71, 10.1111/j.1432-0436.1987.tb00182.x
Kédinger, 1987, Importance of fibroblastic support for in vitro differentiation of intestinal endodermal cells and for their response to glucocorticoids, Cell Differ, 20, 171, 10.1016/0045-6039(87)90431-3
Kédinger, 1990, Smooth muscle actin expression during rat gut development and induction in fetal skin fibroblastic cells associated with intestinal embryonic epithelium, Differentiation, 43, 87, 10.1111/j.1432-0436.1990.tb00434.x
Kondo, 1984, Growth and differentiation of fetal rat small intestinal epithelium in tissue culture, Exp. Cell Res, 153, 121, 10.1016/0014-4827(84)90454-3
McAteer, 1983, Medium hydrated collagen gels as an explant support in organ culture, J. Tiss. Culture Meth, 7, 117, 10.1007/BF01665954
Montgomery, 1986, Differentiated function of cultured fetal intestinal epithelial cells determined by extra-cellular matrix, Gastroenterology, 92, 1540
Moyer, 1990, Colon cancer cells, In In Vitro Propagation and Characterisation of Normal, Preneoplastic, and Neoplastic Colonic Epithelial Cells
Négrel, 1983, Establishment and characterisation of an epithelial intestinal cell line form rat fetus, Exp. Cell Res, 143, 427, 10.1016/0014-4827(83)90069-1
Neutra, 1989, Differentiation of Intestinal Cells In Vitro, In Functional Epithelial Cells In Culture, 363
Osborn, 1984, Monoclonal antibodies specific for vimentin, Eur. J. Cell Biol, 34, 137
Quaronl, 1980, Establishment and characterisation of intestinal epithelial cell cultures, Meth. Cell Biol, 21B, 403, 10.1016/S0091-679X(08)60695-0
Schor, 1980, Cell proliferation and migration on collagen substrata in vitro, J. Cell Sci, 41, 159, 10.1242/jcs.41.1.159
Skalli, 1989, Myofibroblasts from diverse pathologic settings are heterogenous in their content of actin isoforms and intermediate filament proteins, Lab. Invest, 60, 275
Smith, 1988, Inhibition of pluripotential embryonic stem cell differentiation by purified peptides, Nature, 336, 688, 10.1038/336688a0
Vidrich, 1988, A method for the establishment of normal adult mammalian colonic epithelial cell cultures: In Vitro, Cell. Dev. Biol, 24, 188, 10.1007/BF02623545
Weiser, 1973, Intestinal epithelial cell surface membrane glycoprotien synthesis, J. Biol. Chem, 248, 2536, 10.1016/S0021-9258(19)44141-0
Wright, 1988, Regulation of cellular proliferation by heparin and heparan sulphate, In Heparin, 295