Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Kỹ thuật định lượng tác động của các chất chống oxy hóa từ thực phẩm lên sự chuyển vị của yếu tố phiên mã và sản xuất nitric oxide trong tế bào nuôi cấy
Tóm tắt
Các chất chống oxy hóa từ thực phẩm có thể ảnh hưởng đến các quá trình tế bào liên quan đến các bệnh viêm mãn tính như xơ vữa động mạch. Chúng tôi đã sử dụng các kỹ thuật không tiêu chuẩn để định lượng tác động của các loại isoflavone đậu nành genistein và daidzein lên sự chuyển vị của Yếu tố nhân - κB (NF-κB) và sản xuất nitric oxide (NO), những yếu tố quan trọng trong các bệnh này. Sự chuyển vị được định lượng bằng cách sử dụng kính hiển vi huỳnh quang miễn dịch độ phân giải cao và phân tích hình ảnh tỷ lệ. NO được định lượng bằng phương pháp điện hóa sau khi khử các sản phẩm oxy hóa của nó trong dịch nuôi cấy tế bào. Việc kích hoạt dòng tế bào đại thực bào monoocyte chuột RAW 264.7 đã làm tăng tỷ lệ nhuộm miễn dịch hạt nhân so với tế bào chất cho NF-κB. Sự gia tăng này trở nên trầm trọng hơn bởi sự điều trị trước bằng genistein hoặc daidzein. Để cho thấy rằng sự giảm cũng có thể được phát hiện, sự điều trị trước bằng chiết xuất vỏ cây thông Pycnogenol® đã được kiểm tra và cho thấy làm giảm sự chuyển vị. Sản xuất NO cũng gia tăng do sự kích hoạt, nhưng bị giảm bởi sự điều trị trước bằng genistein hoặc daidzein. Trong dòng tế bào nội mô người EA.hy926, sản xuất thường trực là có thể phát hiện và đã tăng lên do thrombin. Các phương pháp huỳnh quang và điện hóa cung cấp dữ liệu nhất quán với các kết quả thu được bằng việc sử dụng các bài thử nghiệm dịch chuyển điện di đã được thiết lập và bài Griess, nhưng nhạy hơn, thuận tiện hơn, cung cấp thông tin chi tiết hơn và tránh việc sử dụng đồng vị phóng xạ.
Từ khóa
#antioxidants #genistein #daidzein #NF-κB #nitric oxide #chronic inflammationTài liệu tham khảo
Anderson, J., Johnstone, B. and Cook-Newell, M. (1995) Metaanalysis of the effects of soy protein intake on serum lipids.New England Journal of Medicine 333, 276–282.
Berkels, R., Purol-Schnabel, S. and Roesen, R. (2001) A new method to measure nitrate/nitrite with a NO-sensitive electrode.Journal of Applied Physiology 90, 317–320.
Biggers, J.D. and Curnow, D.H. (1954) Oestrogenic activity of subterranean clover. I. The oestrogenic activity of genistein.Biochemical Journal 58, 278–282.
Cho, K.J., Yun, C.H., Yoon, D.Y., Cho, Y.S., Rimbach, G., Packer, L. and Chung, A.S. (2000) Effects of bioflavanoids extracted from the bark of the Pinus maritima on proinflammatory cytokine interleukin-1 production in lipopolysaccharide-stimulated RAW 264.7.Toxicology and Applied Pharmacology 168, 64–71.
Choi, C., Cho, H., Park, J., Cho, C. and Song, Y. (2003). Suppressive Effects of Genistein on Oxidative Stress and NF-κB Activation in RAW 264.7 Macrophages.Bioscience, Biotechnology and Biochemistry 67, 1916–1922.
Clarkson, T.B. (2002) Soy, soy phytoestrogens and cardiovascular disease.Journal of Nutrition 132, 566S-569S.
de Winther, M.P., Kanters, E., Kraal, G. and Hofker, (2005) M.H. Nuclear factor kappaB signaling in atherogenesis.Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology 2005;25:904–914.
Gottstein, N., Ewins, B.A., Ecclestone, C., Hubbard, G.P., Kavanagh, I.C., Minihane, A-M., Weinberg, P.D. and Rimbach, G. (2003) Effect of genistein and daidzein on platelet aggregation and monocyte and endothelial function.British Journal of Nutrition 89, 607–616.
Griendling, K.K., Sorescu, D., Lassegue, B. and Ushio-Fukai, M. (2000) Modulation of protein kinase activity and gene expression by reactive oxygen species and their role in vascular physiology and pathophysiology.Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology 20, 2175–2183.
Griffith, T.M. (1985) Studies of endothelium-derived relaxant factor (EDRF), its nature and mode of action.European Heart Journal 6, 37–49.
Guo, J-P., Murohara, T., Buerke, M., Scalia, R. and Lefer, A.M. (1996) Direct measurement of nitric oxide release from vascular endothelial cells.Journal of Applied Physiology 81, 774–779.
Janssen, Y.M. and Sen, C.K. (1996) Nuclear Factor κB activity in response to oxidants and antioxidants.Methods in Enzymology 300, 363–374.
Lin, H., Chen, C., Chen, B.D. (2001) Resistance of bone marrow-derived macrophages to apoptosis is associated with the expression of X-linked inhibitor of apoptosis protein in primary cultures of bone marrow cells.Biochemical Journal 353, 299–306.
Marzinzig, M., Nussler, A.K., Stadler, J., Marzinzig, E., Barthlen, W., Nussler, N.C., Beger, H.C., Morris, S.M. Jr and Bruckner, U.B. (1997) Improved Methods to Measure End Products of Nitric Oxide in Biological Fluids: Nitrite, Nitrate, and S-Nitrosothiols.Nitric Oxide 1, 177–189.
Naseem, K.M. (2005) The role of nitric oxide in cardiovascular diseases.Molecular Aspects of Medicine 26, 33–65.
Nier, B.A., Ewins, B.A., Cremers, S.G. and Weinberg, P.D. (2005) Effects of anti-oxidants on gene expression in endothelial cells. In: Packer, L., Füchs, J. and Rimbach, G.H. (Eds.), Nutrigenomics — The role of oxidants and antioxidants in gene expression (Boca Raton: Florida: CRC Press), pp. 141–180.
Park, Y.C., Rimbach, G., Saliou, C., Valacchi, G. and Packer, L. (2000) Activity of monomeric, dimeric and trimeric flavonoids on NO production, TNF-á secretion, and NF-êB-dependent gene expression in RAW 264.7 macrophages.FEBS Letters 465, 93–97.
Rimbach, G.H., Matsugo, S., Ewins, B.E., Vafeidou, K., Turner, S., de Pascual Teresa, S., Minihane, A.M. and Weinberg, P.D. (2003) Antioxidant and free radical scavenging activity of isoflavone metabolites.Xenobiotica 33, 913–925.
Rimbach, G., Weinberg, P.D., de Pascual Teresa, S., Garcia, M., Ewins, B.A., Turner, R., Minihane, A.M., Botting, N., Fairley B., Matsugo, S., Uchida, Y., Cassidy A. (2004) Sulfation of genistein alters its antioxidant properties and its effect on platelet aggregation and monocyte and endothelial function.Biochimica et Biophysica Acta (General Subjects) 1670, 229–237.
Steinberg, D., Parthasarathy, S., Carew, TE., Khoo, J.C. and Witztum, J.L. (1989) Beyond cholesterol. Modifications of low-density lipoprotein that increase its atherogenicity.New England Journal of Medicine 320, 915–924.
Virgili, F., Kobuchi, H. and Packer, L. (1998) Procyanidins extracted from Pinus maritima (Pycnogenol): scavengers of free radical species and modulators of nitrogen monoxide metabolism in activated murine RAW 264.7 macrophage.Free Radical Biology and Medicine 24, 1120–1129.
Zeiher, A.M. and Schachinger, V. (1994) Coronary endothelial vasodilator dysfunction: clinical relevance and therapeutic implications. Zeitschrift für Kardiologie83 Suppl 4, 7–14.