Số lượng phân tử con của phức hợp độc tố thần kinh Clostridium botulinum loại A được xác định bằng phương pháp điện di mao quản không biến tính

The Protein Journal - Tập 27 - Trang 420-425 - 2008
Michael A. Lietzow1, Elizabeth T. Gielow1, Denise Le1, Jifeng Zhang1, Marc F. Verhagen1
1Biopharmaceuticals Department, Allergan, Inc, Irvine, USA

Tóm tắt

Một phương pháp điện di mao quản không biến tính đã được phát triển để đánh giá tỷ lệ số lượng phân tử con của phức hợp độc tố thần kinh Clostridium botulinum loại A. Kết quả cho thấy phức hợp độc tố thần kinh chứa một bản sao của độc tố thần kinh 150 kDa và các phân tử con không độc tố không gây ngưng kết, cùng với 5–6 HA17, 4–5 HA23, 3–4 HA48 và 8–9 HA34. Khối lượng phân tử tính toán cho một phức hợp với tỷ lệ này nằm trong khoảng 880 đến 1.000 kDa. Khối lượng phân tử của phức hợp nguyên vẹn được xác định bằng phương pháp HPLC loại bỏ kích thước (SE-HPLC) và SE-HPLC kết hợp với phát hiện tán xạ ánh sáng laser đa góc. Dựa trên sự so sánh với một hỗn hợp các protein chuẩn, phân tích SE-HPLC cho giá trị khối lượng phân tử là 880 kDa trong khi phân tích tán xạ ánh sáng chỉ ra khối lượng trung bình là 925 ± 45 kDa. Sự tương đồng gần gũi giữa các giá trị khối lượng phân tử được xác định bởi ba phương pháp hỗ trợ cho tỷ lệ số lượng phân tử con được đề xuất cho phức hợp độc tố thần kinh Clostridium botulinum loại A.

Từ khóa

#Clostridium botulinum #độc tố thần kinh #điện di mao quản #phân tích khối lượng phân tử #HPLC

Tài liệu tham khảo

Jankovic J, Brin MF (1997) Muscle Nerve Suppl 6:S129–S145 Thant Z-S, Tan E-K (2003) Med Sci Monit 9:RA40–RA48 Abrams A, Kegeles G, Hottle GA (1946) J Biol Chem 164:63–79 Lamanna C, McElroy OE, Eklund HW (1946) Science 103:613–614 Kegeles G (1946) J Am Chem Soc 68:1670 Putnam FW, Lamanna C, Sharp DG (1946) J Biol Chem 165:735–736 DasGupta BR, Boroff DA (1968) J Biol Chem 243:1065–1072 Lamanna C, Lowenthal JP (1951) J Bacteriol 61:751–752 Zhang L, Lin W-J, Li S, Aoki KR (2003) Gene 315:21–32 Dekleva ML, DasGupta BR (1990) J Bacteriol 172:2498–2503 Inoue K, Fujinaga Y, Watanabe T, Ohyama T, Takeshi K, Moriishi K, Nakajima H, Inoue K, Oguma K (1996) Infect Immun 64:1589–1594 Chen F, Kuziemko GM, Stevens RC (1998) Infect Immun 66:2420–2425 Fu F-N, Sharma SK, Singh BR (1998) J Protein Chem 17:53–60 Sugii S, Sakaguchi G (1975) Infect Immun 12:1262–1270 Schantz EJ, Johnson EA (1992) Microbiol Rev 56:80–99 Nyman P, Lindskog S (1964) Biochim Biophys Acta 85:141–151 Stefanye D, Schantz EJ, Spero L (1967) J Bacteriol 94:277–278 Sharma SK, Ramzan MA, Singh BR (2003) Toxicon 41:321–331 Arndt JW, Gu J, Jaroszewski L, Schwarzenbacher R, Hanson MA, Lebeda FJ, Stevens RC (2005) J Mol Biol 346:1083–1093