Nghiên cứu hệ thống cellulolytic của Trichoderma reesei QM 9414

Hành động hạn chế của papain trên các dạng tự nhiên của hai cellobiohydrolase (CBH) từ Trichoderma reesei (CBH I, 65 kDa, và CBH II, 58 kDa) dẫn đến sự tách biệt các mảnh lõi tương ứng (56 kDa và 45 kDa) hoàn toàn hoạt động trên các chất nền nhỏ, tan trong nước, nhưng có hoạt động giảm mạnh (tương ứng là 10% và 50% của giá trị ban đầu) trên cellulose vi tinh thể (Avicel).

Bằng cách định phân một phần ở C-terminus của lõi CBH I và ở N-terminus của lõi CBH II, các vị trí cắt của papain đã được xác định trong các cấu trúc chính (khoảng tại vị trí 431 và 82 tương ứng). Hành động hạn chế này của papain trên các enzyme tự nhiên chỉ ra sự hiện diện của các vùng bản lề nối lõi với các glycopeptide tận cùng. Các chuỗi bảo tồn này xuất hiện ở C hoặc N-terminus của một số enzyme cellulolytic từ Trichoderma reesei [Teeri et al. (1987) Gene 51, 43–52].

Các hoạt động cụ thể của các enzyme nguyên vẹn và các lõi của chúng trên hai dạng cellulose không tan (tinh thể, vô định hình) phân biệt CBH I và CBH II về mặt tính chất hấp phụ và tính chất xúc tác. Các chức năng khác nhau có thể được gán cho các peptide tận cùng: đối với CBH II nguyên vẹn, vùng N-terminus góp phần vào việc liên kết với cả hai loại cellulose; peptide C-terminus đồng hình trong CBH I, tuy nhiên, chỉ ảnh hưởng đến tương tác với cellulose vi tinh thể. Có thể suy luận rằng CBH I và lõi của nó liên kết ưu tiên với các vùng tinh thể. Điều này dường như được xác nhận bởi các kết quả thí nghiệm hỗn hợp CBH I/CBH II.