Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Demonstração đồng thời hoạt động phosphatase kiềm và acid trong các mẫu mô được nhúng trong nhựa và ức chế khác nhau của các hoạt động này
Tóm tắt
Hoạt động phosphatase kiềm (AlP) và phosphatase acid (AcP) được chứng minh đồng thời trong các mẫu mô được lấy từ chuột, chuột cống và người. Phương pháp này bao gồm việc cố định mô trong ethanol, nhúng trong glykol methacrylate (GMA), và chứng minh hoạt động của AlP và AcP bằng cách sử dụng một kỹ thuật nhuộm azo gắn kết đồng thời với naphthol phosphate thay thế làm cơ chất. Hoạt động của AlP được chứng minh đầu tiên, tiếp theo là hoạt động của AcP. Cả hai hoạt động enzyme đều được chứng minh trong các mẫu mô từ xương được cố định và/hoặc lưu trữ trong aceton hoặc ethanol 70% trong thời gian lên đến 14 ngày hoặc lưu trữ trong GMA trong 2 tháng. Tuy nhiên, hoạt động của AlP trong các mẫu mô từ xương được cố định trong formalin 10%, glutaraldehyde 2% hoặc formal-calcium bị ức chế đáng kể sau 3–7 ngày và không còn phát hiện được sau 14 ngày cố định. Hơn nữa, hoạt động AlP bị giảm trong các mẫu mô từ xương được cố định trong ethanol 70% hoặc formalin 10% và sau đó bị khử khoáng trong EDTA 10% (pH 7) trong 2 ngày, và hoạt động này hoàn toàn bị loại bỏ trong các mẫu mô từ xương bị khử khoáng sau đó trong acid formic: 20% sodium citrate (1:1, pH 4.2) trong 2 ngày. Nhúng methyl methacrylate (MMA) với nồng độ trên 66% hoàn toàn ức chế hoạt động của AlP. Tuy nhiên, hoạt động AcP chỉ bị ức chế một phần bởi formalin, glutaraldehyde hoặc formal-calcium sau 7 hoặc 14 ngày cố định hoặc bởi nhúng MMA và không bị ảnh hưởng bởi tác nhân khử khoáng acid formic-citrate trong 2 ngày. Trong khi hoạt động AcP được bảo tồn trong xương được cố định trong formalin và sau đó bị khử khoáng trong EDTA, hoạt động này hoàn toàn bị loại bỏ khi quá trình khử khoáng EDTA được thực hiện trên xương đã được cố định trong ethanol 70%. Những kết quả này cho thấy hoạt động AlP và AcP của xương có thể được chứng minh đồng thời trong cùng một mẫu bằng cách sử dụng một kỹ thuật chuẩn bị mô đơn giản và rằng các hoạt động này được giữ lại trong các mô được cố định và/hoặc lưu trữ trong aceton, ethanol 70% hoặc GMA, nhưng bị ức chế khác nhau bởi các chất cố định khác đã được nghiên cứu, và bởi EDTA, acid formic-citrate, và nhúng MMA.
Từ khóa
#phosphatase kiềm #phosphatase acid #xương #mô #kỹ thuật chuẩn bị môTài liệu tham khảo
Baneroft JD (1975) Histochemical techniques, 2nd edn. Butter-worths, London, pp 223–229
Barka T, Anderson PJ (1962) Histochemical methods for acid phosphatase using hexazonium parasosanilin as coupler. J Histochem Cytochem 10:741–753
Borgers M (1973) The cytochemical application of new potent inhibitors of alkaline phosphatases. J Histochem Cytochem 21:812–824
Burstone MS (1959) Histochemical demonstration of acid phosphatase activity in osteoclasts. J Histochem Cytochem 7:39–41
Burstone MS (1960a) Hydrolytic enzymes in dentinogenesis and osteogenesis. In: Sognnaes RF (ed) Calcification in biological systems, American Association for the Advancement of Science, Washington, DC, pp 217–243
Burstone MS (1960b) Histochemical observations on enzymatic processes in bones and teeth. Ann NY Acad Sci 85:431–444
Burstone MS (1962) Enzyme histochemistry and its application in the study of neoplasms. Academic Press, New York, pp 160–292
Changus GW (1957) Convenient histochemical phosphatase technique. Cancer 10:560–562
Davis BJ, Ornstein L (1959) High resolution enzyme localization with a new diazo reagent, “hexazonium pararosaniline.” J Histochem Cytochem 7:297–298
Doyle WL (1948) Effects of dehydrating agents on phosphatases in the lymphatic nodules of the rabbit appendix. Proc Soc Exp Biol Med 69:43–44
Fallon MD, Teitelbaum SL (1981) A simple procedure for the rapid histologic diagnosis of metabolic bone disease. Calcif Tissue Int 33:281–283
Farley JR, Ivey JL, Baylink DJ (1980) Human skeletal alkaline phosphatase — kinetic studies including pH dependence and inhibition by theophylline. J Biol Chem 255:4680–4686
Farley JR, Chesnut CH III, Baylink DJ (1981) Improved method for quantitative determination in seum of alkaline phosphatase of skeletal origin. Clin Chem 27:2002–2007
Farley JR, Puzas JE, Baylink DJ (1982) Effect of skeletal alkaline phosphatase inhibitors on bone cell proliferation in vitro. Min Electrolyle Metab 7:316–323
Gomori G (1952) Microscopic histochemistry: Principles and practice. University of Chicago Press, Chicago, Illinois
Greep RO, Fischer CJ, Morse A (1947) Histochemical demonstration of alkaline phosphatase in decalcified dental and osseous tissues. Science 105:666
Hammarström LE, Hanker JS, Toverud SU (1971) Cellular differences in acid phosphatase isoenzymes in bone and teeth. Clin Orthop Rel Res 78:151–167
Horobin RW (1982) Histochemistry: An explanatory outline of histochemistry and biophysical staining. Gustav Fischer, New York Stuttgart pp 187–206
Humason GL (1967) Animal tissue techniques, 2nd edn. Freeman & Co, San Francisco, pp 3–32
Kiernan JA (1981) Histological and histochemical methods. Theory and practice. Pergamon Press, New York, pp 8–24
Liu CC, Rader JI, Gruber H, Baylink DJ (1982) Acute reduction in osteoclast number during bone repletion. Metab Bone Dis Relat Res 4:201–209
Liu CC, Baylink DJ (1984) Differential response in alveolar bone osteoclasts residing at two different bone sites. Calfic Tissue Int 36:182–188
Meunier PJ (1983) Histomorphometry of the skeleton. In: Peck WA (ed) Bone and mineral research, Annual 1. Excerpta Medica, Amsterdam, pp 191–222
Mowry RW (1949) A comparison of technical procedures for the histochemical preservation of alkaline phosphatase. Bull Int Assoc Med Mus 30:95–98
Pearse AGE (1968) Histochemistry: Theoretical and applied, vol 1, 3rd edn. Little, Brown & Co, Boston
Robison R (1923) The possible significance of hexosephosphoric esters in ossification. Biochem J 17:286–293
Schajowicz F, Cabrini RL (1959) Histochemical demonstration of acid phosphatase in hard tissues. Stain Technol 34:59–64
Seligman AM, Chauncey HH, Nachlas MM (1951) Effect of formalin fixation on the activity of five enzymes of rat liver. Stain Technol 26:19–23
Stafford RO, Atkinson WB (1948) Effect of acetone and alcohol fixation and paraffin embedding on activity of acid and alkaline phosphatases in rat tissues. Science 107:279–281
Te Velde J, Burkhardt R, Kleiverda K, Leenheers-Binnendijk L, Sommerfeld W (1977) Methyl methacrylate as an embedding medium in histopathology. Histopathology 1:319–330
Thompson ER, Baylink DJ, Wergedal JE (1975) Increases in number and size of osteoclasts in response to calcium or phosphorus deficiency in the rat. Endocrinology 97:283–289
Troyer H, Nusbickel FR (1975) Enzyme histochemistry of undecalcified bone and cartilage embedded in glycol methacrylate. Acta Histochem 53 (Suppl):198–202
Weber R, Weber J, Niehus B (1961) Activation of acid phosphatase by versene. Helv Physiol Pharmacol Acta 19:97–102
Wergedal JE, Baylink DJ (1969) Distribution of acid and alkaline phosphatase activity in undemineralized sections of the rat tibial diaphysis. J Histochem Cytochem 17:799–806