Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Truy dấu thần kinh hồi phục bằng phân đoạn B của độc tố tả: so sánh ba phương pháp hình ảnh hóa khác nhau
Tóm tắt
Trong báo cáo này, một sự so sánh được thực hiện giữa ba phương pháp hình ảnh hóa khác nhau của các tế bào động kinh cổ áo chuột được gán nhãn hồi phục bằng phân đoạn B của độc tố tả (CTb). CTb là một chất đánh dấu thần kinh hồi phục rất nhạy, có thể được phát hiện bằng các phương pháp miễn dịch hóa hay qua việc sử dụng các hợp chất CTb như CTb-HRP và CTb-FITC hoặc CTb-TRITC, có thể được hình ảnh hóa sau khi phát hiện hóa mô và bằng kính hiển vi huỳnh quang, tương ứng. Các kết quả sau đây đã được thu được. (1) Phát hiện CTb bằng phương pháp miễn dịch với peroxidase và ấp ủ DAB-Ni cung cấp việc đánh dấu tốt nhất các tế bào và các quá trình của chúng, trong khi phát hiện CTb bằng phương pháp miễn dịch với FITC tạo ra việc đánh dấu kém hiệu quả hơn cho các nhánh. (2) Hình ảnh hóa bằng histochemical của hợp chất CTb-HRP cho kết quả tương tự như hóa miễn dịch CTb nhưng tạo ra hình ảnh có hạt rõ rệt hơn của nhãn, điều này có thể ảnh hưởng đến việc xác định các nhánh xa. Ngoài ra, phân tích vi điện tử trực tiếp của các cấu trúc được gán nhãn có thể đạt được. (3) Hình ảnh hóa CTb-FITC và CTb-TRITC cho phép các thí nghiệm đánh dấu kép nhưng các tế bào được đánh dấu chỉ biểu hiện huỳnh quang trong thân tế bào và các nhánh gần. (4) Các yếu tố khác ngoài độ mạnh của việc đánh dấu, chẳng hạn như đánh dấu kép, sự bảo tồn nhãn, khả năng tương thích với các kỹ thuật khác và ngay cả lý do kinh tế phải được cân nhắc khi lựa chọn các phương pháp hình ảnh hóa.
Từ khóa
#độc tố tả #CTb #hình ảnh hóa #thần kinh học #đánh dấu huyền thoạiTài liệu tham khảo
bruce, k. & grofova, i. (1992) Notes on a light and electron microscopic double labeling method combining anterograde tracing with Phaseolus vulgaris leucoagglutinin and retrograde tracing with cholera toxin subunit B. J. Neurosci. Meth. 45, 23–33.
burstein, r., wang, j., elde, r. p. & giesler Jr, g. j. (1990) Neurons in the sacral parasympathetic nucleus that project to the hypothalamus do not also project through the pelvic nerve; a double labeling study combing Fluoro-gold and cholera toxin B in the rat. Brain Res. 506, 159–65.
dederen, p. J. W. c. & joosten, e. A. j. (1989) A triple labeling method: HRP anterograde tract tracing combined with double immunofluorescent cell staining in developing neural tissue of the rat. J. Neurosci. Meth. 30, 71–6.
dederen, p. J. W. c., gribnau, a. A. m. & curfs, m. H. J. m. (1991) Retrograde neuronal tracing with cholera toxin B subunit (CTb): comparison of three different visualization methods. Eur. Soc. Histotechnol. 1, 49 (abstract).
dederen, p. J. W. c., gribnau, a. a. m. & curfs, m. h. j. m. (1992) De verschillende detectie mogelijkheden van de retrograde tracer Cholera Toxine subunit B (CTb). Histotechniek 3, 98–105.
ericson, h. & blomqvist, a. (1988) Tracing of neuronal connections with cholera toxin subunit B: light and electron microspic immunohistochemistry using monoclonal antibodies. J. Neurosci. Meth. 24, 225–35.
fort, p., sakai, k., luppi, p. h., salvert, d. & jouvet, m. (1989) Monoaminergic, peptidergic and cholinergic afferents to the cat facial nucleus as evidenced by a double immuno staining method with unconjugated cholera toxin as a retrograde tracer. J. Comp. Neurol. 283, 285–302.
jhaveri, s., carman, l. & hahm, j. (1988) Visualizing anterogradely transported HRP by use of TMB histochemistry: comparison of the TMB-SNF and TMB-AHM methods. J. Histochem. Cytochem. 36, 103–5.
joosten, e. a. j., gribnau, a. a. m. & dederen, p. j. w. c. (1987) Ultrastructural visualization of anterogradely transported horseradish peroxides in the developing corticospinal tract of rat. J. Histochem. Cytochem. 35, 623–6.
liang, f., moret, v., wiesendanger, m. & rouiller, e. m. (1991) Corticomotoneuronal connections in the rat: evidence from double-labeling of motoneurons and corticospinal axon arborizations. J. Comp. Neurol. 311, 356–66.
lima, d. & coimbra, a. (1989) Morphological types of spinomesencephalic neurons in the marginal zone (lamina I) of the rat spinal cord, as shown after retrograde labeling with cholera toxin subunit B. J. Comp. Neurol. 279, 327–39.
luppi, p. h., sakai, k., fort, p., salvert, d. & jouvet, m. (1987) Peptidergic hypothalamic afferents to the cat raphe pallidus as revealed by a double immunostaining technique using unconjugated cholera toxin as retrograde tracer. Brain Res. 402, 339–45.
luppi, p., fort, p. & jouvet, m. (1990) Iontophoretic application of unconjugated cholera toxin B subunit (CTb) combined with immunohistochemistry of neurochemical substances: a method for transmitter identification of retrogradely labeled neurons. Brain Res. 534, 209–24.
mesulam, m. m. (1978) Tetramethylbenzidine for horseradish peroxidase neurochemistry: a non-carcinogenic blue reaction product with superior sensitivity for visualizing neural afferents. J. Histochem. Cytochem. 26, 106–17.
mesulam, m. m. & rosene, d. l. (1979) Sensitivity in horseradish peroxidase neurochemistry: a comparative and quantitative study of nine methods. J. Histochem. Cytochem. 27, 763–73.
olucha, f., martinez-garcia, f. & lopéz-garcia, c. (1985) A new stabilizing agent for the tetramethylbenzidine (TMB) reaction product in the histochemical detection of horseradish peroxidase (MRP). J. Neurosci. Meth. 13, 131–8.
rye, d. b., saper, c. b. & wainer, b. h. (1984) Stabilization of the TMB reaction product. J. Histochem. Cytochem. 32, 1145–53.
trojanowsky, j. q., gonatas, j. o. & gonatas, n. k. (1982) Horseradish peroxidase (HRP) conjugates of cholera toxin and lectins are more sensitive retrogradely transported markers than free HRP. Brain Res. 23, 33–50.
trojanowsky, j. q. (1983) Native and derivative lectins for vivo studies of neuronal connectivity and neuronal cell biology. J. Neurosci. Meth. 9, 185–205.
wan, x. S. t., trojanowsky, j. q. & gonatas, j. o. (1982) Cholera toxin and wheat germ agglutinin conjugates as neuroanatomical probes: their uptake and clearance, transganglionic and retrograde transport and sensitivity. Brain Res. 243, 215–24.