Tách chiết RNA thông tin chuỗi nặng của globulin miễn dịch từ RNA khối u đa gai ở chuột

Một quy trình được mô tả để tinh chế quy mô lớn RNA mRNA chuỗi nhẹ (L) và chuỗi nặng (H) từ các khối u plasmacytoma được sản xuất ở chuột. RNA nguyên vẹn được kết tủa chọn lọc với hiệu suất cao từ các khối u đông lạnh được đồng hóa trong 3 M LiCl và 6 M urê. RNA mRNA chuỗi L và H được tinh chế bằng sắc ký oligo(dT)-cellulose và hoặc bằng ly tâm gradient sucrose trong các điều kiện ngăn ngừa sự kết tụ hoặc bằng phương pháp điện di gel chuẩn bị phân giải cao trong điều kiện không biến tính. RNA mRNA γ2a và α chuỗi nặng lắng đọng như các thành phần chính ở 15,5 S và 16,5 S tương ứng, khi RNA mRNA chuỗi L lắng đọng ở dạng 12-S. RNA mRNA chuỗi H được tách ra bằng cách rửa liên tục trong quá trình điện di gel chuẩn bị hoàn toàn phân lập khỏi cả RNA mRNA chuỗi L và rRNA 18-S còn lại, và di chuyển như các thành phần đơn lẻ có kích thước 1900 ± 50 nucleotide trên các gel phân giải biệt hóa phân tích. Các RNA mRNA chuỗi H đã được tinh chế một phần được dịch mã thành các thành phần chính có trọng lượng phân tử 56000 (γ2a) và 60000 (α) trong lysate reticulocyte thỏ phụ thuộc vào mRNA, trong khi RNA mRNA chuỗi L tạo ra các polypeptide có trọng lượng phân tử 25000 (λ) và 27000 (к). Tối đa 95% các sản phẩm dịch mã do các mRNA tinh chế hướng dẫn đã được kết tủa miễn dịch bằng cách sử dụng huyết thanh kháng thể đặc hiệu. Độ tinh khiết của các RNA mRNA chuỗi L và H được đánh giá bằng cách lai cDNA tương ứng với DNA plasmid tái tổ hợp dư thừa. Các kết quả cho thấy độ tinh khiết tối thiểu là 47% (γ2a), 62% (α) đối với RNA mRNA chuỗi H và 60% (к) đối với RNA mRNA chuỗi L.