Thí nghiệm clamp màng plasmolemma trên tế bào rễ thực vật: quy trình tách protoplast nhanh chóng với mức độ tiếp xúc tối thiểu với enzyme phân hủy thành tế bào

Protoplasma - Tập 171 - Trang 104-109 - 1992
S. A. Vogelzang1, H. B. A. Prins1
1Ecotrans, Laboratory of Plant Physiology, Department of Plant Biology, Biological Centre, University of Groningen, Haren, The Netherlands

Tóm tắt

Một quy trình tách biệt thuận tiện và nhanh chóng cho protoplast tế bào rễ, phù hợp cho các thí nghiệm clamp màng, đã được phát triển cho tế bào rễ của cà chua (Lycopersicon esculentum) và các loài Plantago, được trồng trên thủy canh. Quy trình này dựa trên việc tiếp xúc tối thiểu của tế bào với các hỗn hợp enzyme phân hủy thành tế bào. Sau thời gian ủ 30 phút trong hỗn hợp enzyme phân hủy thành tế bào, tất cả các tế bào nổi tự do đã được loại bỏ. Tiếp theo, phần rễ được rửa sạch và một nhóm tế bào thứ hai, vẫn có mặt bên trong mô, đã được giải phóng bằng cách áp dụng áp lực cơ học. Các protoplast mới được giải phóng đã được lọc và thu thập trên đáy kính của đĩa clamp màng. Môi trường tắm đã được rửa sạch nhiều lần để loại bỏ các sợi cellulose và protoplast không gắn vào kính. Việc loại bỏ các sợi cellulose này đã cải thiện đáng kể tỷ lệ thành công của niêm phong. Các protoplast đã được tách ra là phù hợp cho các thí nghiệm clamp màng trong chế độ ghép tế bào, toàn tế bào và cấu hình ghép tách biệt.

Từ khóa

#protoplast #tế bào rễ #clamp màng #enzyme phân hủy #cà chua #Plantago #thủy canh

Tài liệu tham khảo

Beilby MJ (1990) Current-voltage curves for plant membrane studies: a critical analysis of the method. J Exp Bot 41: 165–182 Bilkey PC, Cocking EC (1982) A non-enzymatic method for the isolation of protoplasts from callus ofSaintpaulia ionantha (African Violet). Z Pflanzenphysiol 105: 285–288 Brüggemann W, Moog PR, Nakawage H, Janiesch P, Kuiper PJC (1990) Plasma membrane-bound NADH: Fe3+ EDTA reductase and iron deficiency in tomato (Lycopersicon esculentum). Is there a turbo reductase? Physiol Plant 79: 339–346 Bush DS, Hedrich R, Schroeder JI, Jones RL (1988) Channel-mediated potassium flux in barley aleurone protoplasts. Planta 176: 368–377 Fairly KA, Walker NA (1989) Patch clamping corn protoplasts. Gigaseal frequency is not improved by congo red inhibition of cell wall regeneration. Protoplasma 153: 111–116 Fischer JMC, Peterson CA, Bols NC (1985) A new fluorescent test for cell vitality using calcofluor white M2R. Stain Techn 60: 69–79 Hahne G, Herth W, Hoffmann F (1983) Wall formation and cell division in fluorescence-labelled plant protoplasts. Protoplasma 115: 217–221 Hamill O, Marty A, Neher E, Sakmann B, Sigworth FJ (1981) Improved patch clamp techniques for high-resolution current recording from cells and cell free membrane patches. Pflügers Arch 391: 85–100 Hedrich R, Flügge UI, Fernandez JM (1986) Patch clamp studies of ion transport in isolated plant vacuoles. FEBS 204: 228–232 Hoagland DR, Davis AR (1923) The uptake and accumulation of electrolytes in plant cells. Protoplasma 6: 610–626 Ince C, Van Dissel JT, Diesselhoff MMC (1985) A teflon culture dish for high magnification microscopy and measurements in single cells. Pflügers Arch 403: 240–244 Kanai R, Edwards GE (1973) Purification of enzymatically isolated mesophyll protoplasts from C3, C4 and Crassulacean acid metabolism plants using an aqueous dextran polyethylene glycol two phase system. Plant Physiol 52: 484–490 Klercker JAF (1892) Eine Methode zur Isolierung lebender Protoplasten. Öfversigt Kongl Vetenskap Akadem For Handl 49: 463–474 Küster E (1910) Eine Gewinnung abnorm großer Protoplasten. Arch Entwickl 30: 351–355 — (1927) Über die Gewinnung nackter Protoplasten. Protoplasma 3: 223–233 Maathuis FJM, Prins HBA (1990) Patch clamp studies on root cell vacuoles of a salt tolerant and a salt sensitivePlantago species. Plant Physiol 92: 23–28 Miedema H (1992) Patch clamp studies onElodea protoplasts. PhD Thesis, Dept of Plant Physiology, University of Groningen, The Netherlands Moran N, Ehrenstein G, Iwasa K, Mischke C, Bare C, Sattler RL (1988) Potassium channels in motor cells ofSamanea saman. Plant Physiol 88: 643–648 Nagy JI, Maliga P (1976) Callus induction and plant regeneration from mesophyll protoplasts ofNicotiana sylvestris. Z Pflanzenphysiol 78: 453–455 Neher E, Sakmann B (1976) Single channel currents recorded from membrane of denervated frog muscle fibres. Nature 260: 799–802 Patnaik G, Wilson D, Cocking EC (1981) Importance of enzyme purification for increased plating efficiency and plant regeneration from single protoplasts. Z Pflanzenphysiol 102: 199–295 Pilet PE (1972) Transaminase activities of root protoplasts. Experienta 28: 638–639 Schachtman DP, Tyerman SD, Terry BR (1991) The K+/Na+ selectivity of a cation channel in the plasma membrane of root cells does not differ in salt-tolerant and salt-sensitive wheat species. Plant Physiol 97: 598–605 Schroeder JI, Hedrich R, Fernandez JM (1984) Potassium-selective single channels in guard cell protoplasts ofVicia faba. Nature 312: 361–362