Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Phân tích PCR để phát hiện và phân biệt các chất gắn kết lông K88ab1, K88ab2, K88ac và K88ad trong các chủng E. coli tách biệt từ lợn con bị tiêu chảy
Tóm tắt
Các mồi được thiết kế và chuẩn bị, đồng thời xác định các điều kiện cho việc phát hiện và phân biệt các chủng vi khuẩn E. coli gây độc tố ruột tách biệt từ những con lợn bị tiêu chảy bằng phương pháp PCR. Các mồi K88/1 và K88/2 là các oligomer 25 bp tương ứng với một vùng của các gen mã hóa cho một trong các biến thể huyết thanh của kháng nguyên K88 (K88ab1, K88ab2, K88ac hoặc K88ad). Kết quả dương tính của PCR là một sản phẩm khuếch đại có kích thước 792 bp cho biến thể K88ab và K88ad hoặc 786 bp cho biến thể K88ac. Các biến thể huyết thanh riêng lẻ của các gen kháng nguyên K88 có thể được phân biệt bằng cách cắt các sản phẩm khuếch đại PCR thu được bằng các endonuclease hạn chế. Phân tích PCR trên 674 chủng E. coli được tách biệt từ lợn bị tiêu chảy cho thấy có 184 chủng dương tính với K88. Bằng cách sử dụng các endonuclease hạn chế, 4 trường hợp chủng dương tính với K88 được phân loại là biến thể K88ab, 180 là biến thể K88ac và không có chủng nào chứa gen cho biến thể K88ad. Có 95% sự trùng khớp với kết quả xét nghiệm huyết thanh bằng cách sử dụng kháng thể đặc hiệu cho K88ab, K88ac và K88ad.
Từ khóa
#PCR #E. coli #lợn con bị tiêu chảy #kháng nguyên K88 #khuếch đại gen #endonuclease hạn chếTài liệu tham khảo
Alexa P., Šťouračová K., Hamřík J., Rychlík I.: Gene typing of the colonization factors K88 (F4) in enterotoxigenicEscherichia coli strains isolated from diarrheic piglets.Vet.Med.Czech46, 46–49 (2001).
Asheg A.A., Levkut M., Revajová V., Ševčíková Z., Kolodziezski L., Pistl J.: Spreading ofSalmonella enteritidis in the cecum of chickens.Folia Microbiol.48, 277–279 (2003).
Bakker D., Willemsen P.T.J., Simons L.H., van Zjderveld F.G., de Graaf F.K.: Characterization of the antigenic and adhesive properties of FaeG, the major subunit of K88 fimbriae.Mol.Microbiol.6, 247–255 (1992).
Bogyiová E., Siegfried L., Kmeťova M., Šandorčinová Z., Liptáková A., Biroš E.: Occurrence and genetic association of selected virulence factors in clinicalEscherichia coli isolates.Folia Microbiol.47, 73–77 (2002).
Choi C., Chae C.: Genotypic prevalence of F4 variants (ab, ac, and ad) inEscherichia coli isolated from diarrheic piglets in Korea.Vet. Microbiol.67, 307–310 (1999).
Debroy C., Maddox C.W.: Identification of virulence attributes of gastrointestinalEscherichia coli isolates of veterinary significance.Anim.Health Res.Rev.1, 129–140 (2001).
Dykes C.W., Halliday I.J., Read M.J., Hobden A.N., Harford S.: Nucleetide sequences of four variants of the K88 gene of porcine enterotoxigenicEscherichia coli.Infect.Immun50, 279–283 (1985).
Foged N.T., Klemm P., Elling F., Jorsal S.E., Zeuthen J.: Monoclonal antibodies to K88ab, K88ac, and K88ad fimbriae from enterotoxigenicEscherichia coli.Microb.Pathog.1, 57–69 (1986).
Francis D.H.: EnterotoxigenicEscherichia coli infection in pigs and its diagnosis.J.Swine Health Prod.10, 171–175 (2002).
Franklin M.A., Francis D.H., Baker D., Mathew A.G.: A PCR-based method of detection and differentiation of K88+ adhesiveEscherichia coli.J.Vet.Diagn.Ivest.8, 460–463 (1996).
Gaastra W., Mooi F.R., Stuitje A.R., de Graaf F.K.: The nucleotide sequence of the gene encoding the K88ab protein subunit of poreine enterotoxigenicEscherichia coli.FEMS Microbiol.Lett.12, 41–46 (1981).
Gaastra W., Klemm P., de Graaf F.K.: The nucleotide sequence of the K88ad protein subunit of porcine enterotoxigenicEscherichia coli.FEMS Microbiol.Lett.18, 188–183 (1983).
Guinee P.A.M., Jansen W.H.: Behavior ofEscherichia coli K antigens K88ab, K88ac, and K88ad in immunoelectrophoresis, double diffusion, and hemagglutination.Infect.Immun.23, 700–705 (1979).
Harel J., Lapointe H., Fallora A., Lartie L.A., Bigras-Poulin M., Lariviere S., Fairbrother J.M.: Detection of genes for fimbrial antigens and enterotoxins associated withEscherichia coli serogroups isolated from pigs with diarrhea.J.Clin.Microbiol.29, 745–752 (1991).
Holoda E., Mikula I.: Construction of recombinant K88 DNA with Ptac promoter.Folia Microbiol.39, 171–175 (1994).
Holoda E., Mikula I.: The production of K88 antigen byEscherichia coli andSalmonella typhimurium strains with recombinant DNA.Acta Vet.Hung.43, 95–103 (1995).
Holoda E., Bianchi A.T.J., Smits M., Degeus B., Bergen H., Briare J., Mikula I.: Utilization of recombinant DNA technologies in immunoprophylaxis, p. 20 inProc. 21st Congr. Czechoslovak Society for Microbiology with International Participation, Hradec Králové (Czechia) 1998.
Holoda E., Hung Vu Khac, Bergen H., Holečková B., Wantrubova A., Andrašková S., Pilipčinec E.: Primers for the detection ofEscherichia coli K88ab+.Folia Veter.46, 119–122 (2002).
Josephsen J., Hansen F., de Graaf F.K., Gaastra W.: The nucleotide sequence of the K88ac fimbriae of porcine enterotoxigenicEscherichia coli.FEMS Microbiol.Lett.25, 301–306 (1984).
Nagy B., Fekete P.Z.: EnterotoxigenicEscherichia coli (ETEC) in farms animals.Vet.Res.30, 259–284 (1999).
Ojeniyi B., Arhens P., Meyling A.: Detection of fimbrial and toxin genes inEscherichia coli and their prevalence in piglets with diarrhea. The application of colony hybridization assay, polymerase chain reaction and phenotypic assays.J.Vet.Med.B41, 49–59 (1994).
Ondrašovič M., Ondrašovičova O., Vargová M., Kočišová A.:Environmental Problems in Veterinary Practice. University of Veterinary Medicine, Košice (Slovakia) 1997.
Ørskov I., Ørskov F., Sojka W.J., Wittig W.: K antigens K88ab (L) and K88ac (L) inE. coli. A new O antigen: O147 and a new K antigen: K89 (B).Acta Pathol.Microbiol.Scand.Sect.B62, 439–447 (1964).
Osek J.: Prevalence of virulence factors ofEscherichia coli strains isolated from diarrheic and healthy piglets after weaning.Vet.Microbiol.68, 209–217 (1999).
Osek J., Svennerhom A.M.: Determination of K88 antigens and enterotoxins ofEscherichia coli strains isolated from Polish piglets with diarrhea by the use of enzyme-linked immunosorbent assays.Vet.Microbiol.29, 299–307 (1992).
Osek J., Truszczynsky M.: Occurrence of fimbriae and enterotoxins inEscherichia coli strains isolated from piglets in Poland.Comp. Immun.Microbiol.Infect.Dis.15, 285–292 (1992).
Shi C.H., Sun S.H., Song Y.M., Chen J.G., Huang C.F.: Sequence analysis of the gene encoding the K88ac adhesion antigen of porcine enterotoxigenicE. coli.Sheng Wu Hua Hsueh Tsa Chin.6, 134–140 (1990).
Soderlind O., Thafvelin B., Mollby R.: Virulence factors inEscherichia coli strains isolated from Swedish piglets with diarrhea.J.Clin.Microbiol.26, 879–884 (1988).
Šplichalová A., Šplíchal I., Trebichavský I., Hojna H.: Expression of inflammatory markers in pig amnion after intraamniotic infection with nonpathogenic or enteropathogenicEscherichia coli.Folia Microbiol.49, 751–756 (2004).
Vargová M., Ondrašovičová O., Sasáková N., Ondrašovič M., Novak P.: Effect of natural zeolite (clinoptilolite) on microbial decomposition processes in stored pig-slurry solids.Folia Microbiol.44, 729–734 (1999).
Westerman R.B., Mills K.M., Pillips R.M., Fortner G.W., Greenwood J.M.: Predominance of the ac variant in K88-positiveEscherichia coli isolated from swine.J.Clin.Microbiol.26, 149–150 (1988).
Wilson R.D., Francis D.H.: Fimbriae and enterotoxin associated withEscherichia coli serogroups isolated from pigs with colibacillosis.Am.J.Vet.Res.47, 213–217 (1986).
Wray C., McLaren I.M., Caroll P.J.:Escherichia coli isolated from farm animals in England and Wales between 1986 and 1991.Vet.Res.133, 439–442 (1993).