Tối ưu hóa phương pháp xét nghiệm miễn dịch kết tủa cromatin ở loài dây sống biển Ciona

Springer Science and Business Media LLC - Tập 15 - Trang 520-525 - 2013
Hitoshi Aihara1, Lavanya Katikala1, Robert W. Zeller2, Anna Di Gregorio1, Yutaka Nibu1
1Department of Cell and Developmental Biology, Weill Medical College of Cornell University, New York, USA
2Department of Biology, San Diego State University, San Diego, USA

Tóm tắt

Xét nghiệm miễn dịch kết tủa cromatin (ChIP) cho phép xác định hiệu quả sự chiếm dụng các vùng gen trong cơ thể bởi các protein liên kết DNA, qua đó giúp dự đoán các trình tự điều hòa cis trong silico và hướng dẫn việc xác thực chúng trong môi trường sống. Vì những lý do này, các xét nghiệm này cùng với các biến thể của chúng (ví dụ, ChIP-on-chip và ChIP-sequencing) hiện đang được mở rộng cho một số sinh vật mô hình không phổ biến, khi mà khả năng có sẵn của các kháng thể đặc hiệu ngày càng tăng. Tại đây, chúng tôi mô tả việc phát triển một kháng thể đa dòng chống lại protein Brachyury của loài dây sống biển Ciona intestinalis và cung cấp một giao thức ChIP chi tiết mà có thể dễ dàng điều chỉnh cho các sinh vật biển khác.

Từ khóa


Tài liệu tham khảo

Caputi L, Andreakis N, Mastrototaro F, Cirino P, Vassillo M, Sordino P (2007) Cryptic speciation in a model invertebrate chordate. Proc Natl Acad Sci U S A 104:9364–9369 Chabry L (1887) Contribution a l’embryologie normale et teratologique des Ascidies simples. J Anat Physiol (Paris) 23:167–319 Christiaen L, Wagner E, Shi W, Levine M (2009) Electroporation of transgenic DNAs in the sea squirt Ciona. Cold Spring Harb Protoc pdb.prot5345 Conklin EG (1905) The organization and cell lineage of the ascidian egg. J Acad Nat Sci (Phila) 13:1–119 Corbo JC, Levine M, Zeller RW (1997) Characterization of a notochord-specific enhancer from the Brachyury promoter region of the ascidian, Ciona intestinalis. Development 124:589–602 Davidson B, Christiaen L (2006) Linking chordate gene networks to cellular behavior in ascidians. Cell 124:247–250 Dehal P, Satou Y, Campbell RK, Chapman J, Degnan B, De Tomaso A, Davidson B, Di Gregorio A et al (2002) The draft genome of Ciona intestinalis: insights into chordate and vertebrate origins. Science 298:2157–2167 Delsuc F, Brinkmann H, Chourrout D, Philippe H (2006) Tunicates and not cephalochordates are the closest living relatives of vertebrates. Nature 439:965–968 Di Gregorio A, Levine M (1999) Regulation of Ci-tropomyosin-like, a Brachyury target gene in the ascidian, Ciona intestinalis. Development 126:5599–5609 Dunn MP, Di Gregorio A (2009) The evolutionarily conserved leprecan gene: its regulation by Brachyury and its role in the developing Ciona notochord. Dev Biol 328:561–574 Gaffney DJ, McVicker G, Pai AA, Fondufe-Mittendorf YN, Lewellen N, Michelini K, Widom J, Gilad Y, Pritchard JK (2012) Controls of nucleosome positioning in the human genome. PLoS Genet 8(11):e1003036 Gazdoiu S, Yamoah K, Wu K, Escalante CR, Tappin I, Bermudez V, Aggarwal AK, Hurwitz J, Pan ZQ (2005) Proximity-induced activation of human Cdc34 through heterologous dimerization. Proc Natl Acad Sci U S A 102:15053–15058 Kanda M, Wada H, Fujiwara S (2009) Epidermal expression of Hox1 is directly activated by retinoic acid in the Ciona intestinalis embryo. Dev Biol 335:454–463 Kubo A, Suzuki N, Yuan X, Nakai K, Satoh N, Imai KS, Satou Y (2010) Genomic cis-regulatory networks in the early Ciona intestinalis embryo. Development 137:1613–1623 Lee TI, Johnstone SE, Young RA (2006) Chromatin immunoprecipitation and microarray-based analysis of protein location. Nat Protoc 1:729–748 Lemaire P (2009) Unfolding a chordate developmental program, one cell at a time: invariant cell lineages, short-range inductions and evolutionary plasticity in ascidians. Dev Biol 332:48–60 Nelson JD, Denisenko O, Bomsztyk K (2006) Protocol for the fast chromatin immunoprecipitation (ChIP) method. Nat Protoc 1:179–185 Oda-Ishii I, Di Gregorio A (2007) Lineage-independent mosaic expression and regulation of the Ciona multidom gene in the ancestral notochord. Dev Dyn 236:1806–1819 Passamaneck YJ, Katikala L, Perrone L, Dunn MP, Oda-Ishii I, Di Gregorio A (2009) Direct activation of a notochord cis-regulatory module by Brachyury and FoxA in the ascidian Ciona intestinalis. Development 136:3679–3689 Singer JB, Harbecke R, Kusch T, Reuter R, Lengyel JA (1996) Drosophila brachyenteron regulates gene activity and morphogenesis in the gut. Development 122:3707–3718 Swalla BJ (2006) Building divergent body plans with similar genetic pathways. Heredity (Edinb) 97:235–243 Vinson JP, Jaffe DB, O’Neill K, Karlsson EK, Stange-Thomann N, Anderson S, Mesirov JP, Satoh N et al (2005) Assembly of polymorphic genomes: algorithms and application to Ciona savignyi. Genome Res 15:1127–1135 Vujovic S, Henderson S, Presneau N, Odell E, Jacques TS, Tirabosco R, Boshoff C, Flanagan AM (2006) Brachyury, a crucial regulator of notochordal development, is a novel biomarker for chordomas. J Pathol 209:157–165 Whittaker JR (1977) Segregation during cleavage of a factor determining endodermal alkaline phosphatase development in ascidian embryos. J Exp Zool 202:139–153 Yang XR, Ng D, Alcorta DA, Liebsch NJ, Sheridan E, Li S, Goldstein AM, Parry DM, Kelley MJ (2009) T (brachyury) gene duplication confers major susceptibility to familial chordoma. Nat Genet 41:1176–1178 Yasuo H, Satoh N (1993) Function of vertebrate T gene. Nature 364:582–583 Zega G, Biggiogero M, Groppelli S, Candiani S, Oliveri D, Parodi M, Pestarino M, De Bernardi F, Pennati R (2008) Developmental expression of glutamic acid decarboxylase and of gamma-aminobutyric acid type B receptors in the ascidian Ciona intestinalis. J Comp Neurol 506:489–505 Zeller RW (2004) Generation and use of transgenic ascidian embryos. Methods Cell Biol 74:713–730