Multiplex FISH và hình ảnh DNA ba chiều với xung laser femtosecond gần hồng ngoại

Chúng tôi báo cáo về một công nghệ mới cho việc phát hiện gen và nhiễm sắc thể đa màu cũng như hình ảnh DNA ba chiều (3D) thông qua việc kích thích đa photon của nhiều fluorophore FISH và phẩm màu DNA. Các xung laser femtosecond gần hồng ngoại ở 770 nm được sử dụng để đồng thời kích thích huỳnh quang khả kiến của một loạt các fluorophore FISH, chẳng hạn như FITC, DAC, Cy3, Cy5, Cy5.5, rhodamine, spectrum aqua, spectrum green, spectrum orange, Jenfluor và Texas red, cũng như các phẩm màu DNA/nhiễm sắc thể, ví dụ như Hoechst 33342, DAPI, SYBR green, iodide propidium, homodimer ethidium và Giemsa. Ngoài lợi thế của việc sử dụng chỉ một bước sóng kích thích cho nhiều fluorophore khác nhau, kích thích đa photon còn cung cấp khả năng nội tại cho việc hình ảnh huỳnh quang 3D. Công nghệ này đã được sử dụng trong di truyền học ở người để chẩn đoán các biến thể số lượng nhiễm sắc thể và vi giảm đoạn. Đặc biệt, hình ảnh 3D đa màu của vị trí nội nhân của các lãnh thổ nhiễm sắc thể được gắn FISH trong các nhân của tế bào dịch ối đã được thu thập. Sử dụng độ sâu thâm nhập ánh sáng cao ở 770 nm, việc cắt quang của DNA được gắn Hoechst 33342 trong các tế bào nuôi cấy sống và trong mô của chuột mang khối u sống đã được thực hiện.