Các kháng thể đơn dòng phân biệt dạng phosphoryl hóa và không phosphoryl hóa của các neurofilaments in situ.

Mẫu nhuộm hóa mô miễn dịch của 37 kháng thể đơn dòng neuron’s cụ thể đã được mô tả trước đây chia thành bốn nhóm: (i) nhóm kháng thể kháng synap, (ii) nhóm kháng thể kháng sợi tế bào thần kinh, (iii) nhóm kháng thể kháng perikaryon-sợi thần kinh, và (iv) một kháng thể đơn lẻ với một epitope phân phối rộng phủ kín mẫu của nhóm ii và iii. Những kháng thể của các nhóm ii, iii, và iv được chứng minh là đặc hiệu đối với các tiểu đơn vị của neurofilament, mặc dù có ít sự chồng lấn trong các mẫu nhuộm giữa nhóm ii và iii. Chúng tôi đã khảo sát 9 kháng thể này về khả năng phân biệt trạng thái chức năng của neurofilaments phụ thuộc vào quá trình phosphoryl hóa. Sau khi tiêu hóa bằng phosphatase, nhuộm điện di lớp ngoài của các thành phần neurofilaments bị xóa bởi 5 kháng thể từ nhóm ii, tăng lên với ba kháng thể từ nhóm iii, và không bị ảnh hưởng với kháng thể iv. Nhuộm hóa mô miễn dịch của các mẫu paraffin cố định Bouin của não chuột không bị ảnh hưởng bởi việc tiền điều trị với phosphatase. Với kháng thể của nhóm ii, việc tiêu hóa bằng trypsin cũng không làm thay đổi nhuộm, nhưng khi tiếp sau là tiêu hóa bằng phosphatase, nhuộm bị giảm với ba trong số năm kháng thể. Ngược lại, việc tiêu hóa bằng trypsin đã loại trừ tất cả nhuộm với mỗi kháng thể từ nhóm iii. Nếu tiếp sau bằng tiêu hóa với phosphatase, nhuộm tái xuất hiện, nhưng mẫu nhóm iii được thay thế bằng mẫu nhóm ii. Nhuộm của mẫu này lại bị xóa bởi việc điều trị với trypsin lần hai. Kháng thể từ nhóm iv mất hầu hết mẫu nhuộm của nhóm ii và iii khi các mẫu được tiêu hóa bằng trypsin. Mẫu nhóm ii tái xuất hiện và thực tế được tăng cường bởi một quá trình điều trị với phosphatase sau đó và lại giảm đi bởi lần điều trị với trypsin lần hai. Nhuộm bởi bốn trong năm kháng thể từ nhóm ii bị ức chế bởi phosphate vô cơ. Dữ liệu chỉ ra rằng một số tế bào thần kinh, các nhánh tương ứng của chúng, và ít nhất các sợi trục gần có neurofilaments không phosphoryl hóa và các sợi dài, bao gồm cả sợi trục tận, có neurofilaments phosphoryl hóa. Chúng tôi đề xuất rằng phosphoryl hóa có thể là một yếu tố trong việc ổn định các cấu trúc neurofilament dày đặc và tính đa dạng của các cấu trúc này có thể đóng một vai trò trong khả năng đa chức năng của từng tế bào thần kinh.