Nhân bản phân tử và đặc trưng hóa các gen của chuột đồng mã hóa các đồng loại của β-Defensins ở người
Tóm tắt
β-Defensins là các peptide mang điện tích dương với hoạt tính kháng khuẩn phổ rộng, có thể đóng vai trò trong hệ thống phòng thủ niêm mạc của một số cơ quan. Chúng đã được phân lập ở nhiều loài, và trong cơ thể người, hai loại β-defensins đã được xác định. Ở đây, chúng tôi báo cáo việc xác định hai gen mã hóa các đồng loại β-defensin ở chuột đồng. Các cDNA một phần được phát hiện qua việc tìm kiếm cơ sở dữ liệu nhãn gắn chuỗi biểu hiện, và các mồi được thiết kế để tạo ra các chuỗi mã hóa mRNA đầy đủ. Một gen có độ tương đồng cao với gen β-defensin-1 ở người (HBD-1) và gen β-defensin-1 ở chuột (mouse) cả về cấp độ axit nucleic và axit amin, và được gọi là β-defensin-1 ở chuột đồng (RBD-1). Gen còn lại, được đặt tên là RBD-2, có tính đồng nhất với HBD-2 và gen peptide kháng khuẩn trong khí quản bò (TAP). Các prepropeptides dự đoán có tính điện tích dương mạnh, dài 69 và 63 acid amin đối với RBD-1 và RBD-2, tương ứng, và chứa motif sáu cysteine đặc trưng của β-defensins. Các gen β-defensin được xác định chỉ ra gần gũi trên nhiễm sắc thể 16 của chuột đồng và có mối liên kết chặt chẽ với các gen α-defensins, cho thấy rằng chúng là một phần của một cụm gen, tương tự như cấu trúc được báo cáo ở người. Phân tích Northern blot cho thấy cả hai bản sao mRNA của RBD-1 và RBD-2 có chiều dài khoảng 0.5 kb; mRNA của RBD-1 được phiên mã phong phú trong thận của chuột đồng, trong khi RBD-2 phổ biến ở phổi. Phân tích phản ứng chuỗi polymerase phiên mã ngược cho thấy rằng mRNA của RBD-1 và RBD-2 phân bố trong nhiều mô khác nhau. Tại phổi, sự biểu hiện mRNA của RBD-1 được xác định tại biểu mô khí quản trong khi RBD-2 được biểu hiện trong các tế bào loại II phế nang. Tóm lại, chúng tôi đã đặc trưng hóa hai đồng loại β-defensin mới ở chuột đồng. Chuột đồng có thể là một mô hình hữu ích để điều tra chức năng và đóng góp của β-defensins vào sự phòng thủ của vật chủ trong phổi, thận và các mô khác.
Từ khóa
#β-Defensins #chuột đồng #gen #phân tích Northern blot #mô hình nghiên cứuTài liệu tham khảo
Dobbs L. G. Gonzalez R. Williams M. C. An improved method for isolating type II cells in high yield and purity.Am. Rev. Respir. Dis.1341986141145
Reynolds H. Y. Integrated host defense against infections The lung. Reynolds H. Y. 1997 2353 2365 Raven Press Ltd. New York N.Y
Snyder J. M. The biology of the surfactant-associated proteins Pulmonary surfactant: biochemical functional regulatory and clinical concepts. Bourbon J. 1991 105 126 CRC Press Inc. Boca Raton Fla
Stein L. Kruglyak D. Slonim D. Lander E. “RHMAPPER” software. Whitehead Institute/Massachusetts Institute of Technology Center for Genome Research. 1995Available at http://www.genome.wi.mit.edu/ftp/pub/software/rhmapper and via anonymous ftp to ftp.genome.wi.mit.edu directory /pub/software/rhmapper.
Watanabe S. Matsushita K. Stokes J. B. McCray P. B. Jr. Developmental regulation of epithelial sodium channel subunit mRNA expression in rat colon and lung.Am. J. Physiol.2751998G1227G1235
Welsh M. J. Boat T. F. Tsui L.-C. Beaudet A. L. Cystic fibrosis The metabolic and molecular basis of inherited disease. Scriver C. R. Beaudet A. L. Sly W. S. Valle D. 1995 3799 3876 McGraw-Hill Inc. New York N.Y
Zucht H. D. Grabowsky J. Schrader M. Liepke C. Jurgens M. Knappe P. S. Forssmann W. G. Human β-defensin-1: a urinary peptide present in variant molecular forms and its putative functional implication.Eur. J. Med. Res.31998315323