Đo lường osteocalcin huyết thanh bằng phương pháp miễn dịch phóng xạ hai vị trí đặc hiệu cho người
Tóm tắt
Chúng tôi đã phát triển một phương pháp miễn dịch phóng xạ hai vị trí (IRMA) nhạy cảm và đặc hiệu cho osteocalcin của người, sử dụng osteocalcin của người làm chuẩn và hai kháng thể đơn dòng được sinh ra chống lại osteocalcin của người tinh sạch từ xương vỏ người, một kháng thể đối kháng khu vực 25–37 và một đánh dấu đối kháng chuỗi 5–13 của phân tử. Một khoảng rộng rãi các mức độ osteocalcin (lên đến 300 ng/ml) có thể được đo với độ nhạy là 0.4 ng/ml. Hệ số biến thiên trong và giữa các thử nghiệm lần lượt nhỏ hơn 4% và 6%. Tỷ lệ phục hồi của osteocalcin người từ mẫu huyết thanh dao động từ 96 đến 103%. IRMA cho thấy mối quan hệ tuyến tính với các mẫu được pha loãng theo chuỗi trong một khoảng rộng các mức osteocalcin huyết thanh, ngay cả ở những bệnh nhân suy thận mạn tính đang chạy thận. Sự cạn kiệt huyết thanh trong osteocalcin toàn phần cho thấy IRMA phát hiện, bên cạnh peptide nguyên vẹn, một mảnh giữa N-terminal lớn đại diện cho khoảng 50% tổng mức osteocalcin trong các cá thể bình thường và bệnh nhân mắc bệnh Paget, và lên đến 75% ở bệnh nhân suy thận mạn tính. Mảnh lớn này, trước đây chưa được nhận biết vì không thể phân biệt với osteocalcin nguyên vẹn với sắc ký gel, không được tạo ra trong ống nghiệm bằng cách ủ huyết thanh lên đến 26 giờ. Chúng tôi đã đo osteocalcin trong huyết thanh của 309 người trưởng thành khỏe mạnh (180 nam và 129 nữ, độ tuổi từ 20–95), 36 bệnh nhân mắc bệnh Paget, 12 bệnh nhân có cường tuyến giáp nguyên phát, 70 bệnh nhân suy thận mạn tính đang chạy thận, và 10 bệnh nhân đang điều trị bằng corticosteroid, đồng thời với IRMA người và một phương pháp miễn dịch phóng xạ (RIA) truyền thống dựa trên thuốc thử bò. Một mối tương quan chặt chẽ (r = 0.889) được quan sát giữa hai xét nghiệm trong quần thể bình thường, nhưng các giá trị thu được bằng IRMA cao hơn khoảng ba lần (trung bình 23.3 ± 10.5 so với 7.5 ± 3.4 ng/ml) so với những giá trị thu được bằng RIA. Khi báo cáo dưới dạng giá trị Z, tức là số độ lệch chuẩn so với trung bình bình thường dự đoán đã điều chỉnh theo giới tính và tuổi tác, hai xét nghiệm này (IRMA và RIA) cho kết quả đồng nhất ở bệnh nhân mắc bệnh Paget (4.05 ± 6.21 so với 2.41 ± 2.53), cường tuyến giáp nguyên phát (4.14 ± 7.17 so với 2.13 ± 2.28), suy thận mạn tính (25.32 ± 24.49 so với 6.93 ± 5.48), và điều trị glucocorticoid (-1.48 ± 0.78 so với −1.11 ± 0.57). Tuy nhiên, IRMA nhạy cảm hơn khi phân biệt với các đối chứng ở tất cả các bệnh lý xương chuyển hóa này vì các giá trị tuyệt đối của điểm Z trung bình với IRMA cao hơn đáng kể so với những giá trị thu được với RIA (p < 0.05–0.0001). Chúng tôi kết luận rằng IRMA osteocalcin mới đặc hiệu cho người này có thể nhạy cảm hơn so với RIA bò trong việc điều tra lâm sàng các bệnh lý xương chuyển hóa.
Từ khóa
Tài liệu tham khảo
Hauschka, 1975, Direct identification of the calcium-binding amino acid gamma-carboxyglutamate in mineralized tissue, Proc Natl Acad Sci USA, 72, 3925, 10.1073/pnas.72.10.3925
Price, 1976, Characterization of a gamma-carboxyglutamic containing protein from bone, Proc Natl Acad Sci USA, 73, 1447, 10.1073/pnas.73.5.1447
Beresford, 1984, Production of osteocalcin by human bone cells in vitro. Effects of 1,25(OH)2D3, 24,25 (OH)2D3, parathyroid hormone, and glucocorticoids, Metab Bone Dis Rel Res, 5, 229, 10.1016/0221-8747(84)90064-X
Mundy, 1983, Chemotactic activity of the gamma carboxyglutamic acid containing protein in bone, Calcif Tissue Int, 385, 164, 10.1007/BF02405025
Glowacki, 1987, Impaired recruitment and differentiation of osteoclast progenitors by osteocalcin deplete bone implants, Cell Differentiation, 21, 247, 10.1016/0045-6039(87)90479-9
Price, 1980, New biochemical marker for bone metabolism: Measurement by radioimmunoassay for gla protein in the plasma of normal subjects and patients with bone disease, J Clin Invest, 66, 878, 10.1172/JCI109954
Delmas, 1983, Assessment of bone turnover in postmenopausal osteoporosis of serum bone gla protein, J Lab Clin Med, 102, 470
Gundberg, 1983, Urinary γ carboxyglutamic acid serum osteocalcin as bone markers: Studies in osteoporosis and Paget's disease, J Clin Endocrinol Metab, 57, 1221, 10.1210/jcem-57-6-1221
Deftos, 1982, Changes in plasma bone gla protein during treatment of bone disease, Calcif Tissue Int, 34, 121, 10.1007/BF02411221
Slovik, 1984, Clinical evaluation of bone turnover by serum osteocalcin measurements in a hospital setting, J Clin Endocrinol Metab, 59, 228, 10.1210/jcem-59-2-228
Delmas, 1983, Effects of renal function on plasma levels of bone gla protein, J Clin Endocrinol Metab, 57, 1028, 10.1210/jcem-57-5-1028
Brown, 1984, Serum bone gla-protein: A specific marker for bone turnover in postmenopausal osteoporosis, Lancet, 1, 1091, 10.1016/S0140-6736(84)92506-6
Charles, 1985, Estimation of bone turnover evaluated by 47Ca-kinetics. Efficiency of serum bone gamma-carboxyglutamic acid containing protein, serum alkaline phosphatase, and urinary hydroxyproline excretion, J Clin Invest, 76, 2254, 10.1172/JCI112234
Malluche, 1984, Plasma levels of bone gla-protein reflect bone formation in patients on chronic maintenance dialysis, Kidney Int, 26, 869, 10.1038/ki.1984.230
Delmas, 1985, Serum bone gla-protein compared to bone histomorphometry in endocrine diseases, Bone, 6, 339, 10.1016/8756-3282(85)90326-6
Charhon, 1986, Serum bone gla protein in renal osteodystrophy: Comparison with bone histomorphometry, J Clin Endocrinol Metab, 63, 892, 10.1210/jcem-63-4-892
Eastell, 1988, Bone formation rate in older normal women: Concurrent assessment with bone histomorphometry, calcium kinetics, and biochemical marker, J Clin Endocrinol Metab, 67, 741, 10.1210/jcem-67-4-741
Delmas, 1988, Osteoporosis: Etiology, Diagnosis and Management, 297
Poser, 1980, Isolation and sequence of vitamin K-dependent protein from human bone, J Biol Chem, 225, 8685, 10.1016/S0021-9258(18)43554-5
Delmas, 1980, Biochemical markers of bone turnover for the clinical assessment of metabolic bone disease, Endocrinol Clin North Am, 19, 1
Delmas, 1990, Bone gla protein (osteocalcin) assay standardization report, J Bone Miner Res, 5, 5, 10.1002/jbmr.5650050104
Taylor, 1988, Development of a new radioimmunoassay for human osteocalcin: Evidence for a midmolecule epitope, Metabolism, 37, 872, 10.1016/0026-0495(88)90122-9
Gundberg, 1986, Multiple immunoreactive forms of osteocalcin in uremic serum, J Clin Invest, 77, 1762, 10.1172/JCI112499
Tracy, 1990, Comparison of monoclonal and polyclonal antibody-based for osteocalcin: A study of sources of variation in assay results, J Bone Miner Res, 5, 451, 10.1002/jbmr.5650050506
Demiaux, 1990, Rapid extraction of non collagenous proteins from human bone, J Bone Miner Res, 5
Stahli, 1983, Spleen cell analysis and optimal immunization for high frequency production of specific hybridomas, Methods Enzymol, 92, 26, 10.1016/0076-6879(83)92006-2
Greenwood, 1963, The preparation of 131I-labelled human growth hormone, Biochem J, 89, 114, 10.1042/bj0890114
Tarallo, 1990, Plasma osteocalcin: Biological variations and reference limits, Scand J Clin Lab Invest, 50, 649, 10.3109/00365519009089183
Pietschmann, 1991, Increased serum osteocalcin levels in patients with lactase deficiency, Am J Gastroenterol, 56, 72
Pietschmann, 1988, Decreased serum osteocalcin levels in phenprocoumontreated patients, J Clin Endocrinol Metab, 66, 1071, 10.1210/jcem-66-5-1071
Sebert, 1987, Plasma bone gla-protein: Assessment of its clinical value as an index of bone formation in hemodialyzed patients, Bone Miner, 2, 21
Bergmann, 1990, Comparative study of the changes in insulin-like growth factor-I, procollagen-III N-terminal extension peptide, bone gla-protein, and mineral content in children with Turner's syndrome treated with recombinant growth hormone, J Clin Endocrinol Metab, 71, 1461, 10.1210/jcem-71-6-1461
Gundberg, 1983, Measurement of γ carboxyglutamate and circulating osteocalcin in normal children and adults, Clin Chim Acta, 128, 1, 10.1016/0009-8981(83)90049-9
Koyama, 1991, A one step sandwich enzyme immunoassay for γ carboxylated osteocalcin using monoclonal antibodies, J Immunol Methods, 139, 17, 10.1016/0022-1759(91)90346-H
Epstein, 1984, Differences in serum bone gla protein with age and sex, Lancet, 1, 307, 10.1016/S0140-6736(84)90360-X
Catherwood, 1985, Determinants of bone γ-carboxyglutamic acid containing protein in plasma of healthy aging subjects, Bone, 6, 9, 10.1016/8756-3282(85)90400-4
Orwoll, 1990, Serum osteocalcin (BGP) levels in normal men: A longitudinal evaluation reveals an age-associated increase, J Bone Miner Res, 5, 259, 10.1002/jbmr.5650050309
Delmas, 1983, Increase in serum bone gamma carboxyglutamic acid protein with aging in women, J Clin Invest, 71, 1316, 10.1172/JCI110882
Kelly, 1989, Age and menopause-related changes in indices of bone turnover, J Clin Endocrinol Metab, 69, 1160, 10.1210/jcem-69-6-1160
Johansen, 1988, Plasma BGP: An indicator of spontaneous bone loss and of the effects of oestrogenous treatment in postmenopausal women, Eur J Clin Invest, 18, 191, 10.1111/j.1365-2362.1988.tb02412.x
Plantalech, 1991, Impairment of gamma carboxylation of circulating osteocalcin (bone gla protein) in elderly women, J Bone Miner Res, 11, 1211, 10.1002/jbmr.5650061111
Delmas, 1986, Serum bone gla protein is not a good marker of bone turnover in Paget's disease of bone, Calcif Tissue Int, 38, 60, 10.1007/BF02556596
Wilkinson, 1986, Serum osteocalcin concentrations in Paget's disease of bone, Arch Intern Med, 146, 268, 10.1001/archinte.1986.00360140074010
Reid, 1986, Low serum osteocalcin levels in glucocorticoid-treated asthmatics, J Clin Endocrinol Metab, 62, 379, 10.1210/jcem-62-2-379
Garrel, 1988, Effect of moderate physical training on prednisone-induced protein wasting: A study of whole bone and bone metabolism, Metabolism, 37, 257, 10.1016/0026-0495(88)90105-9