Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Phân tích MLPA để phát hiện các sự mất đoạn, nhân bản và tái tổ chức phức tạp trong gen dystrophin: tiềm năng và cạm bẫy
Tóm tắt
Bệnh loạn dưỡng cơ Duchenne (DMD) và bệnh loạn dưỡng cơ Becker (BMD) là những rối loạn lặn nhiễm sắc thể X phổ biến do các đột biến trong gen dystrophin gây ra. Sử dụng phương pháp khuếch đại phụ thuộc vào liên hợp đầu mầm đa gen mới (MLPA), chúng tôi đã thực hiện phân tích hồi cứu và phân tích tiềm năng trên tổng cộng 193 cá nhân. Các lần mất đoạn hoặc nhân bản đã được xác định ở 14 trong số 90 gia đình đã được xét nghiệm âm tính trước đó bằng PCR đa mạch hoặc phân tích FISH. Kết quả không chính xác một phần sau đó đã được xác định ở hai gia đình: sự mất tín hiệu exon 38 trong một trường hợp là do một đột biến p.Q1802X gây tiếng cười, trong khi ở một bệnh nhân khác, sự mất đoạn rõ ràng của exon 37 (trùng với sự nhân bản của các exon 46–53) là do một đa hình p.R1735C. Trong một trường hợp, chúng tôi đã phát hiện một sự tái tổ chức phức tạp liên quan đến một sự nhân bản của hai vùng: dupEX45–48 và dupEX54–55. Chúng tôi kết luận rằng MLPA là một phương pháp nhạy cảm và nhanh chóng đáng kể thay thế cho PCR đa mạch. Nó có thể được sử dụng trên mẫu máu, chồi nhau thai và mô được nhúng trong paraffin. Độ dễ dàng trong việc phát hiện các sự nhân bản và ứng dụng cho phân tích người mang gen nữ rõ ràng là những lợi thế chính của phương pháp này. Tuy nhiên, sự mất đoạn exon đơn rõ ràng được phát hiện bằng MLPA nên được kiểm tra bằng phương pháp độc lập. Những tái tổ chức phức tạp như các đột biến đôi trên cùng một alen khá hiếm gặp.
Từ khóa
#loạn dưỡng cơ Duchenne #loạn dưỡng cơ Becker #gen dystrophin #MLPA #phân tích gen #đột biến #mất đoạn #nhân bảnTài liệu tham khảo
Koenig M, Hoffman EP, Bertelson CJ, Monaco AP, Feener C, Kunkel LM (1987) Complete cloning of the Duchenne muscular dystrophy (DMD) cDNA and preliminary genomic organisation of the DMD gene in normal and affected individuals. Cell 50:509–517
Den Dunnen JT, Grootscholten PM, Bakker E, Blonden LA, Ginjaar HB, Wapenaar MC, van Paassen HM, van Broeckhoven C, Pearson PL, van Ommen GJ (1989) Topography of the Duchenne muscular dystrophy (DMD) gene: FIGE and cDNA analysis of 194 cases reveals 115 deletions and 13 duplications. Am J Hum Genet 45:835–847
Hu XY, Ray PN, Murphy EG, Thompson MW, Worton RG (1990). Duplication mutation at the Duchenne muscular dystrophy locus: its frequency, distribution, origin, and phenotype genotype correlation. Am J Hum Genet 46:682–695
White S, Kalf M, Liu Q, Villerius M, Engelsma D, Kriek M, Vollebregt E, Bakker B, van Ommen GJ, Breuning MH, den Dunnen JT (2002) Comprehensive detection of genomic duplications and deletions in the DMD gene, by use of multiplex amplifiable probe hybridization. Am J Hum Genet 71:365–374
El-Harouni AA, Amr KS, Effat LK, Eassawi ML, Ismail S, Gad YZ, El-Awady MK (2003) The milder phenotype of the dystrophin gene double deletions. Acta Neurol Scand 107:400–404
Bartlett RJ, Walker AP, Laing NG, Koh J (1989) Inherited deletion at the Duchenne dystrophy locus in normal males. Lancet 1:496–497
Laing NG, Layton MG, Johnsen RD, Chandler DC, Mears ME, Goldblatt J, Kakulas BA (1992) Two distinct mutations in a single dystrophin gene: chance occurrence or premutation? Am J Med Genet 42:688–692
Hoop RC, Russo LS, Riconda LS, Hoffman EP (1994) Restoration of half of the normal dystrophin sequence in a double-deletion Duchenne muscular dystrophy family. Am J Med Genet 49:323–327
Chamberlain JS, Gibbs RA, Ranier JE, Nguyen PN, Caskey CT (1988) Deletion screening of the Duchenne muscular dystrophy locus via multiplex DNA amplification. Nucleic Acids Res 16:11141–11156
Yau SC, Bobrow M, Mathew CG, Abbs SJ (1996) Accurate diagnosis of carriers of deletions and duplications in Duchenne/Becker muscular dystrophy by fluorescent dosage analysis. J Med Genet 33:550–558
Armour JA, Sismani C, Patsalis PC, Cross G (2000) Measurement of locus copy number by hybridisation with amplifiable probes. Nucl Acids Res 28:605–609
White SJ, Sterrenburg E, van Ommen GJ, den Dunnen JT, Breuning MH (2003) An alternative to FISH: detecting deletion and duplication carriers within 24 hours. J Med Genet 40:113
Ried T, Mahler V, Vogt P, Blonden L, van Ommen GJ, Cremer T, Cremer M (1990) Direct carrier detection by in situ suppression hybridization with cosmid clones of the Duchenne/Becker muscular dystrophy locus. Hum Genet 85:581–586
Voit T, Neuen-Jacob E, Mahler V, Jauch A, Cremer M (1992) Somatic mosaicism for a deletion of the dystrophin gene in a carrier of Becker muscular dystrophy. Eur J Pediatr 151:112–116
Schouten JP, McElgunn CJ, Waaijer R, Zwijnenburg D, Diepvens F, Pals G (2002) Relative quantification of 40 nucleic acid sequences by multiplex ligation-dependent probe amplification. Nucleic Acids Res 30:57
Beggs AH, Koenig M, Boyce FM, Kunkel LM (1990) Detection of 98% of DMD/BMD gene deletions by polymerase chain reaction. Hum Genet 86:45–48
Becker A, Janssen B, Jauch A (1999) Diagnostic approaches for carriers with deletions in the dystrophin gene. Medizinische Genetik 11:507–512