Tế bào lympho từ thâm nhiễm viêm gan tiêu diệt tế bào gan chuột trong nuôi cấy ban đầu

Springer Science and Business Media LLC - Tập 59 - Trang 263-270 - 1990
G. Ramadori1, U. Moebius2, H. -P. Dienes1, S. Meuer2, K. -H. Meyer zum Büschenfelde3
1Pathologisches Institut, Johannes Gutenberg Universität Mainz, Federal Republic of Germany
2Abteilung Angewandte Immunologie DKFZ Heidelberg, Federal Republic of Germany
3I. Medizinische Klinik und Poliklinik, Johannes Gutenberg Universität Mainz, Mainz, FRG

Tóm tắt

Trong vài năm qua, việc tách biệt tế bào lympho từ các thâm nhiễm viêm trong gan và nuôi cấy chúng trong điều kiện in vitro đã trở nên khả thi. Hầu hết các dòng tế bào lympho thu được là tế bào CD 8 + cytotoxic, nhưng các tương tác giữa các tế bào lympho này và tế bào gan trong nuôi cấy sơ cấp chưa được phân tích trước đây. Trong nghiên cứu này, các tế bào T lympho người đã được nhân đôi từ sinh thiết gan và từ máu ngoại biên của bệnh nhân viêm gan B mạn tính hoặc xơ gan mật nguyên phát, sau khi được phân loại về kiểu hình và chức năng thành tế bào lympho CD 8+ hoặc CD 4+ cytotoxic, đã được kích hoạt một cách độc lập với kháng nguyên bằng cách thêm vào hỗn dịch tế bào kháng thể đơn dòng anti CD 3 hoặc anti CD 2/R-3. Các tế bào đã được kích hoạt sau đó được đồng nuôi cấy với tế bào gan chuột trong điều kiện nuôi cấy sơ cấp. Khả năng tiêu diệt của các tế bào lympho đã được kích hoạt được theo dõi bằng kính hiển vi sáng và điện tử, cũng như bằng cách đo lường sự giải phóng lactate dehydrogenase (LDH) vào môi trường nuôi cấy. Kết quả cho thấy rằng tế bào cytotoxic CD 8 +, nhưng không phải tế bào lympho CD 4 + trợ giúp, đã tiêu diệt rất hiệu quả tế bào gan. Hiệu ứng tiêu diệt phụ thuộc vào thời gian đồng nuôi cấy và tỷ lệ hiệu ứng-đích (E/T). Sự phá hủy hoàn toàn lớp tế bào gan đã được đạt được sau 10-20 giờ đồng nuôi cấy và với tỷ lệ E/T là 10 so với 1. Khi sự giải phóng LDH trong môi trường nuôi cấy đạt khoảng 80% tổng LDH, hầu hết các tế bào gan đã bị tiêu diệt bởi các tế bào lympho đã được kích hoạt. Hoạt động cytotoxic của các dòng tế bào thu được từ các sinh thiết khác nhau là tương đương với các dòng tế bào từ máu ngoại biên. Tế bào gan trong nuôi cấy ban đầu dường như rất nhạy cảm với khả năng tiêu diệt của các tế bào lympho cytotoxic đã được kích hoạt.

Từ khóa

#tế bào lympho #tiêu diệt tế bào gan #viêm gan B #xơ gan mật nguyên phát #nuôi cấy tế bào gan

Tài liệu tham khảo

Dienes HP, Hütteroth T, Hess G, Meuer SC (1987) Immunelectron microscopy observations of the inflammatory infiltrates and HLA-antigens in hepatitis B and Non-A, non-B. Hepatology 7:1317–1325 Ferrari C, Penna A, Sansoni P, Giuberti T, Fiaccadori F (1986) Lymphocytes in chronic active hepatitis. Isolation of aT-cell line specific for hepatitis B core antigen from a patient with chronic active hepatitis B. J Hepatol 3:384–392 Imawari M, Nomura M, Kaieda T, Moriyama T, Oshimi K, Nakamura I, Gunji T, Onishi S, Ishikawa T, Nakagama H, Takaku F (1989) Establishment of a human T-cell clone cytotoxic for both autologous and allogenic hepatocytes from chronic hepatitis patients with type non-A, non B virus. Proc Natl Acad Sci USA 86:2883–2887 Meuer SC, Hauer M, Moebius U, Schiedhelm E, Deutsch K, Schykowski M, Meyer zum Büschenfelde KH (1986) Definition of discrete signals involved in human T cell activation. Mol Immunol 23:1157–1163 Meuer SC, Moebius U, Manns M, Dienes HP, Ramadori G, Hess G, Hercend T, Meyer zum Büschenfelde KH (1988) Clonal analysis of human T lymphocytes infiltrating the liver in chronic active hepatitis B and primary biliary cirrhosis. Eur J Immunol 18:1447–1452 Meyer zum Büschenfelde KH, Manns M (1984) Mechanisms of autoimmune liver disease. Semin Lev Dis 4:26–35 Mieli-Vergani G, Vergani D, Jenkins B (1979) Lymphocyte cytotoxicity to autologous hepatocytes in HBsAg negative chronic active hepatitis. Clin Exp Immunol 38:16–24 Mieli-Vergani G, Vergani D, Portman B (1982) Lymphocyte cytotoxicity to autologous hepatocytes in HBsAg positive chronic liver disease. Gut 23:1029–1036 Mondelli M, Mieli-Vergani G, Alberti A, Vergani D, Portman B (1982) Specificity of T-lymphocyte cytotoxicity to autologous hepatocytes in chronic hepatitis B virus infection: Evidence that T-cells are directed against HB core antigen on hepatocytes. J Immunol 129:2773–2778 Mondelli MU, Bartolotti F, Pontisso P, Rondanelli EG, Williams R, Realdi G, Alberti A, Eddiestone ALWF (1987) Definition of hepatitis B virus (HBV)-specific target antigens recognized by cytotoxic T-cells in acute HBV infection. Clin Exp Immunol 68:242–250 Montano L, Aranguibel F, Bofill M (1983) An analysis of the composition of the inflammatory infiltrate in autoimmune and hepatitis B virus induced chronic liver disease. Hepatology 3:293–296 Montano M, Miescher GC, Goodall AH (1982) Hepatitis B virus and HLA antigen display in the liver during chronic hepatitis B virus infection. Hepatology 2:557–561 Mutchnick MG, Missirian A, Johnson AG (1980) Lymphocytes cytotoxicity in human liver disease using rat hepatocytes monolayer cultures. Clin Immun Pathol 16:423–437 Naumov NV, Mondelli M, Alexander GJM, Tedder ALW, Eddieston RS, Williams R (1984) Relationship between expression of hepatitis B virus antigens in isolated hepatocytes and autologous lymphocyte cytotoxicity in patients with chronic hepatitis B virus infection. Hepatology 4:63–68 Pape GR, Rieber EP, Eisenburg J (1983) Involvement of the cytotoxic suppressor T cell subset in liver tissue injury of patients with acute and chronic liver diseases. Gastroenterology 85:652–657 Paronetto F, Vernace SJ (1975) Immunological studies in patients with chronic active hepatitis. Cytotoxic activity of lymphocytes to autologous liver cells grown in tissue culture. Clin Exp Immunol 19:99–104 Paronetto F, Colucci G, Colombo M (1986) Lymphcoytes in liver diseases. In: Progress in liver diseases (Popper H, Schaffner F (eds) Vol. III. Grune and Stratton. Orlando, Florida, pp 191–208 Peters PJ, Geuze HJ, van der Donk HA, Borst J (1990) A new model for lethal hit delivery by cytotoxic T lymphocytes. Immunol Today 11:28–32 Pignatelli M, Waters J, Brown J (1986) HLA class I antigens on the hepatocyte membrane during recovery from acute hepatitis B virus infection. Hepatology 6:349–353 Poralla T, Hütteroth Th, Meyer zum Büschenfelde KH (1984) Cellular cytotoxicity against autologus hepatocytes in acute and chronic Non-A, non-B hepatitis. Gut 25:114–120 Ramadori G, Lenzi M, Dienes HP, Meyer zum Büschenfelde KH (1983) Binding properties of mechanically and enzymatically isolated hepatocytes for IgG and C3. Liver 3:358–368 Ramadori G, Dienes HP, Burger R, Meuer S, Rieder H, Meyer zum Büschenfelde KH (1986) Expression of Ia antigens on guinea pig Kupffer cells. Studies with monoclonal antibodies. J Hepatol 2:208–217 Ramadori G, Mitsch A, Rieder H, Meyer zum Büschenfelde KH (1988) Alphaand gamma-interferon (IFNα and IFNγ) but not interleukin-1 (IL-1) modulate synthesis and secretion of β2microglobulin by hepatocytes. Eur J Clin Invest 18:343–351 Seglen PD (1979) Preparation of rat liver cells. I. effector of Ca2+ enzymatic dispersion of isolated perfused liver. Exp Cell Res 74:450–454 Si L, Whiteside TL, Schade RR (1983) Studies of lymphocyte subpopulations in the liver tissues of patients with alcoholic liver disease. Alcoholism 7:431–435 Si L, Whiteside TL, Schade RR (1984) T-lymphocyte subsets in liver tissues of patients with primary biliary cirrhosis, patients with primary sclerosing cholangitis (PSC) and normal controls. J Clin Immunol 4:262–272 Thomson AD, Cockrane AMG, McFarlane IG, Eddiestone ALWF (1974) Lymphocyte cytotoxicity to isolated hepatocytes in chronic active hepatitis. Nature 252:721–722 Wands JR, Perrotto JL, Alpert E, Isselbacher KJ (1975) Cell mediated immunity in acute and chronic hepatitis. J Clin Invest 55:921–929