Nghiên cứu các trung gian trong quá trình tái gấp arginine kinase bị biến tính bởi guanidine hydrochloride

Quá trình tái gấp và các trung gian của arginine kinase (AK) bị biến tính bởi guanidine hydrochloride (GuHCl) đã được nghiên cứu từ góc độ hoạt tính enzym, độ phát quang nội tại, độ phát quang 1-anilino-8-naphthalenesulfonate (ANS) và phổ phân cực tròn UV xa (CD). Trong quá trình tái gấp AK, cường độ phát quang tăng với sự chuyển dịch màu xanh đáng kể của cực đại phát xạ. Độ nhoè mol của CD tăng gần giống với AK tự nhiên, so với AK hoàn toàn chưa gấp. Trong quá trình tái gấp AK, 2 trung gian tái gấp đã được quan sát tại các nồng độ từ 0.8–1.0 mol/L và 0.3–0.5 mol GuHCl/L. Vị trí đỉnh của phát xạ phát quang và cấu trúc bậc hai của các trạng thái biến đổi này vẫn giữ nguyên tương đối. Cường độ phát quang tryptophan chỉ tăng một chút. Tuy nhiên, cường độ phát quang ANS đã tăng đáng kể, so với cả trạng thái tự nhiên và trạng thái chưa gấp hoàn toàn. Trung gian tái gấp đầu tiên ở nồng độ trong khoảng từ 0.8–1.0 mol GuHCl/L đại diện cho một "cấu trúc trạng thái globule nóng chảy trước" không có hoạt tính. Trung gian thứ hai, ở nồng độ trong khoảng từ 0.3–0.5 mol GuHCl/L, có nhiều đặc điểm cấu trúc giống với AK tự nhiên, bao gồm cấu trúc bậc hai và bậc ba của nó, và đã phục hồi chức năng xúc tác của nó, mặc dù hoạt tính của nó thấp hơn so với AK tự nhiên. Các kết quả hiện tại cho thấy rằng trong quá trình tái gấp AK bị biến tính bởi GuHCl có ít nhất 2 trung gian tái gấp; đồng thời, các kết quả này cung cấp bằng chứng trực tiếp cho cơ chế phân cấp của sự gấp protein.Key words: arginine kinase, biến tính guanidine, tái gấp, trung gian, trạng thái globule nóng chảy.