Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Phương pháp đo màu dựa trên hydroxamat để phát hiện trực tiếp vi khuẩn sản xuất transglutaminase
Tóm tắt
Enzyme transglutaminase vi sinh vật (MTGase) là một enzyme thương mại đã được áp dụng cho nhiều loại thực phẩm chứa protein để cải thiện tính chất cấu trúc. Việc sàng lọc vi sinh vật sản xuất MTGase từ các nguồn khác nhau có thể dẫn đến phát hiện một loại MTGase mới với các đặc tính khác biệt. Báo cáo này trình bày việc sử dụng phương pháp phát hiện trực tiếp cho vi khuẩn sản xuất MTGase được nuôi cấy trên đĩa thạch bằng phương pháp đĩa giấy lọc (FPD). Nguyên tắc của thử nghiệm là sự hình thành màu đỏ burgundy bởi phức hợp hydroxamate-sắt. Độ chói màu phát triển có tương quan tuyến tính với nồng độ axit hydroxamic trong khoảng 0.1–0.8 μM và được chấm điểm trực quan ở 4 mức: 0, 1, 2 và 3. Streptoverticillium mobaraense DSM 40847, một chủng sản xuất MTGase dương tính, đã được chọn để xác minh và cải tiến phương pháp đề xuất. Các thuộc địa được phát triển trên đĩa thạch dinh dưỡng ở 37°C trong 24 giờ đã được phủ bằng FPD và 30 μl chất nền (CBZ-Gln-Gly và hydroxylamine). Sau khi ấp, 10 μl dung dịch sắt-TCA-HCl được nhỏ lên FPD. Thời gian tối ưu để xúc tác sự hình thành CBZ-Gln-Gly-hydroxamic acid bởi MTGase và thời gian cần thiết để phức hợp hydroxamate-sắt tạo màu lần lượt là 180 và 60 phút. Sử dụng thử nghiệm này, 30 trong số 189 thuộc địa được phân lập từ nước thải và mẫu bông nổi cho thấy thuộc địa dương tính với MTGase, điều này có mối tương quan tốt với việc sàng lọc định lượng hoạt động MTGase (R2 = 0.9758). Kết quả cho thấy thử nghiệm FPD có thể được sử dụng để sàng lọc định tính vi khuẩn sản xuất MTGase.
Từ khóa
#transglutaminase; vi khuẩn sản xuất; hydroxamate; phương pháp phát hiện; sàng lọc định tínhTài liệu tham khảo
Aeschliman D, Paulsson M (1994) Transglutaminases: protein cross-linking enzymes in tissues and fluids. Thromb Haemostasis 71:402–415
Ando H, Adachi M, Umeda K, Matsuura A, Nonaka M, Uchio R, Tanaka H, Motoki M (1989) Purification and characteristics of a novel transglutaminase derived from microorganisms. Agric Biol Chem 53:2613–2617
Bech L, Rasmussen G, Halkier T, Chiba OM, Anderson NL, Kauppinen MS, Sandal T (2002) Transglutaminase from oomycetes. US6428993
Dvilanski A, Britten AFH, Loewy AG (1970) Factor XIII assay by an isotope method. Bri J Haematol 18:399–410
Folk JE, Cole PW (1965) Structural requirements of specific substrates for guinea pig liver transglutaminase. J Biol Chem 240:2951–2960
Immirzi B, Malinconico M, Romano G, Russo R, Santagata G (2003) Biodegradable films of natural polysaccharides blends. J Mater Sci Lett 22:1389–1392
Kulik C, Heine E, Weichold O, Möller M (2009) Synthetic substrates as amine donors and acceptors in microbial transglutaminase-catalysed reactions. J Mol Catal B Enzym 57:237–241
Kurth L, Rogers PJ (1984) Transglutaminase catalyzed cross-linking of myosin to soya protein, casein and gluten. J Food Sci 49:573–576
Leblanc A, Gravel C, Labelle J, Keillor JW (2001) Kinetic studies of guinea pig liver transglutaminase reveal a general-base-catalyzed deacylation mechanism. Biochem 40:8335–8342
Lorand L, Campbell LK, Robertson BJ (1972) Enzymatic coupling of isoniazid to proteins. Biochem 11:434–438
Marconi PF, Meunier V, Vatistas N (1996) Recovery of pickling effluents by electrochemical oxidation of ferrous to ferric chloride. J Appl Electrochem 26(7):693–701
Motoki M, Seguro K (1998) Transglutaminase and its use for food processing. Trends Food SciTechnol 9:204–210
Mousli S, Wakid NW (1977) Ammonia production during clot retraction and its use in assay of fibrinoligase. Clin Chem 23:1739–1743
Negus SS (2002) A novel microbial transglutaminase derived from Streptoverticillium baldaccii. Griffith University, Queensland
Neilson PM (1995) Reactions and potential industrial applications of transglutaminase. Review of literature and patents. Food Biotechnol 9:119–156
Perry MJ, Mahoney SA, Haynes LW (1995) Transglutaminase C in cerebellar granule neurons: regulation and localization of substrate cross-linking. Neuroscience 65:1063–1076
Seguro K, Kumazawa Y, Otsuka T, Toiguchi S, Motoki M (1995) ε-(γ-Glutamyl) lysine: hydrolysis by γ-glutamyl transferase of different origins when free protein bound. J Agric Food Chem 43:1977–1981
Slaughter TF, Achyuthan KE, Lai T-S, Greenberg CS (1992) A microtiter plate transglutaminase assay utilizing 5-(biotinamido)pentylamine as substrate. Anal Biochem 205:166–171