Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Biểu hiện, tinh chế và đặc trưng hóa biến thể mới của protein kinase CK2 ở người
Tóm tắt
Đơn vị xúc tác tái tổ hợp của protein kinase CK2 ở người đã được đột biến tại vùng C-terminus nhằm cố gắng để kích thích đuôi này gập lại. Chúng tôi giả định rằng đoạn C-terminus không cấu trúc này có thể là nguyên nhân dẫn đến tính dễ bị phân hủy cao của enzyme ở người. Dựa vào các tính toán lý thuyết, chúng tôi chọn thay thế hai proline xa nhau bằng alanine (PA 382-384). Biến thể đã được tinh chế đến độ đồng nhất điện di thông qua ba bước sắc ký. Bằng phương pháp quang phổ khúc xạ tròn, chúng tôi đã kiểm tra xem sự thay thế axit amin đôi có ảnh hưởng đến cấu trúc bậc hai của đơn vị α tái tổ hợp hay không. Theo những dự đoán lý thuyết của chúng tôi, chúng tôi nhận thấy rằng hàm lượng α-helix của protein tăng lên khi hai proline xa nhau được thay thế bằng alanine. Hơn nữa, đơn vị xúc tác biến thể cho thấy khả năng liên kết với một chất ức chế cổ điển như heparin bị giảm.
Từ khóa
#protein kinase CK2 #biến thể đột biến #cấu trúc bậc hai #điện di #sắc kýTài liệu tham khảo
Tanks SK & Hunter T (1995) FASEB J. 9: 576–596.
Perich JW, Meggio F, Kitas EA, Valerio RM, Johns RB & Pinna LA (1990) Biochem. Biophys. Res. Commun. 171: 635–642.
Munstermann U, Fritz G, Seitz G, Lu YP, Schneider HR & Issinger OG (1990) Eur. J. Biochem. 189: 251-257.
Litchfield DW & Luscher B. (1993) Mol. Cell. Biochem. 127-128: 187–199.
Allende JE & Allende CC (1995) FASEB J. 9: 313–323.
Zhang S & Kim KH (1997) Arch. Biochem. Biophys. 338: 227–232.
Bousset K, Henriksson M, Luscher-Firzlaff JM, Litchfield DW & Luscher B (1993) Oncogene 8: 3211–3220.
Luscher B, Kuenzel EA, Krebs EG & Eisenman RN (1989) EMBO J. 8: 1111–1119.
McKendrick L & Meek DW (1994) Cell. Mol. Biol. Res. 40: 555–561.
Meggio F, Negro A, Sarno S, Ruzzene M, Bertoli A, Sorgato MC & Pinna LA (2000) Biochem. J. 352: 191–196.
Ahmed K, Gerber DA, Cochet C (2002) Trends Cell. Biol. 12: 226–230.
Issinger OG (1993) Pharmacol. Ther. 59: 1–30.
Hanks SK, Quinn AM & Hunter T (1988) Science 241: 42–52.
Grankowski N, Boldyreff B & Issinger OG (1991) Eur. J. Biochem. 198: 25–30.
Jakobi R & Traugh JA (1995) Eur. J. Biochem. 230: 1111–1117.
Battistutta R, Sarno S, De Moliner E, Marin O, Issinger OG, Zanotti G & Pinna LA (2000) Eur. J. Biochem. 267: 5184–5190.
Niefind K, Guerra B, Pinna LN, Issinger O-G & Schomhurg D. (1998) EMBO J. 17: 2451–2462.
Bosc DG, Slominski E, Sichler C, Litchfield DW (1995) J. Biol. Chem. 270(43): 25872–25878.
Messenger MM, Saulnier RB, Gilchrist AD, Diamond P, Gorbsky GJ, Litchfield DW (2002) J. Biol. Chem. 277(25) 23054–3064.
Niefind K, Guerra B, Ermakowa I & Issinger OG (2000) EMBO J. 20: 5320–5331.
Niefind K, Guerra B, Ermakowa I & Issinger OG (2000) Acta Crystallogr. D. Biol. Crystallogr. 56: 1680–1684.
Vergani L, Canneva F, Ghisellini P & Nicolini C (2002) Protein Expr. Purif. 24: 420–428.
Bradford MM (1976) Anal. Biochem. 72: 248-254.
Gill SC & von Hippel PH (1990) Anal. Biochem. 189: 293–250.
Laemmli UK (1970) Nature 227: 680–685.
Towbin H., Staehelin T & Gordon J (1979) Proc. Natl. Acad Sci USA 76: 4350–4354.
Bartolucci S, Guagliardi A, Rossi M, Nicastro G, de Chiara C, Facci P, Mascetti G & Nicolini C (1997) Biochem. J. 328: 277-285.
Hennessey, JP Jr. & Johnson, WC Jr. (1981) Biochemistry 20: 1085–1094.
Malavalan P & Johnson WC Jr. (1985) Suppl. J. Biosci. 8: 141–149.
Johnson WC Jr. (1990) Proteins 7: 205–211.
Provencher SW & Glöckner J (1981) Biochemistry 20: 33–37.
Sreerama N & Woody RW (2000) Anal. Biochem. 287: 252–260.
Kabsch W & Sander C (1983) Biopolymers 22: 2577–2637.
Garnier J, Gibrat JF & Robson B (1996) Meth. Enzymol. 266: 540–553.
Altschul SF, Madden TL, Schäffer AA, Zhang J, Zhang Z, Miller W & Lipman DJ (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389–3402.
Sarno S, Vaglio P, Meggio F, Issinger OG & Pinna LA (1996) J. Biol. Chem 271: 10595–10601.
Issinger OG, Brockel C, Boldyreff B & Pelton JT (1992) Biochemistry 31: 6098–6103.
Vaglio P, Sarno S, Mario O, Meggio F, Issinger OG & Pinna (1996) FEBS Lett. 380: 25–28.
O'Farrell F, Loog M, Janson IM & Ek P (1999) Biochimica Biophysica Acta 1433: 68–75.