Thiết lập các dòng tế bào chuột có khả năng tiết ra một lượng lớn interleukin 2, 3, 4 hoặc 5, sử dụng các vector biểu hiện cDNA đã được chỉnh sửa

European Journal of Immunology - Tập 18 Số 1 - Trang 97-104 - 1988
Hajime Karasuyama1, Fritz Melchers2
1Basel Institute for Immunology, Switzerland
2Basel Institute for Immunology, Basel

Tóm tắt

Tóm tắtCác dòng tế bào chuột thuộc các dòng di truyền khác nhau đã được thiết lập, có khả năng tiết ra liên tục một lượng lớn interleukin chuột tái tổ hợp (mIL2, mIL3, mIL4 hoặc mIL5). Một vector biểu hiện dựa trên virus papilloma bò hiện có, pBV-lMTHA, đã được sửa đổi để cho phép các tế bào myeloma X63Ag8-653, tế bào fibroblast NIH 3T3 và tế bào khối u vú C127 mang ổn định nhiều bản sao của vector, biểu hiện cDNA được chèn mã hóa một interleukin duy nhất một cách liên tục, và tiết ra interleukin với số lượng lớn. Các dòng tế bào biến đổi với cDNA mIL2 mang ổn định từ 30 đến 100 bản sao của plasmid mỗi tế bào và tiết ra mIL2 sinh học hoạt động một cách liên tục với số lượng tương tự như được sản xuất bởi các tế bào thymo EL4 chuột hoặc các tế bào lách chuột đã được kích thích bằng mitogen. Việc xóa bỏ vùng không dịch mã 3′ chứa các chuỗi giàu AT khỏi cDNA mIL2 đã dẫn đến việc tăng gấp 100 lần trong khả năng sản xuất và tiết ra mIL2 bởi các biến thể. Sự bổ sung của kim loại nặng đã tăng cường sản xuất từ 2 đến 6 lần. Các tế bào biến đổi với cDNA mIL3 đã bị xóa 3′ tiết ra hoạt tính mIL3 cao hơn từ 300 đến 1000 lần so với dòng bạch cầu đơn nhân myelomonocytic WEHI 3. mIL 4 do các biến thể tương tự sản xuất đã kích thích khả năng hấp thu [3H]thymidine của dòng tế bào T, dòng tế bào mast và các tế bào bạch cầu B, đồng thời tăng cường sản xuất IgG1 bởi các tế bào B. Nồng độ IL 4 cao hơn 150 lần so với nồng độ được sản xuất bởi dòng tế bào T 2.19 được kích thích bằng concanavalin A. mIL 5 đã được tiết ra bởi các biến thể tương tự ở titer cao hơn 10 lần so với các tế bào T 2.19 được kích thích bằng concanavalin A, được đánh giá thông qua sự phát triển và trưởng thành của bạch cầu B BCL1. Các vector biểu hiện này được cho là hữu ích trong việc thiết lập các dòng tế bào eukaryote sản xuất protein từ các bản sao cDNA hoàn chỉnh với tỷ lệ cao hơn. Các dòng tế bào đã được thiết lập có khả năng tiết ra IL2, 3, 4 hoặc 5 với tỷ lệ cao nên là nguồn cung cấp hữu ích cho các interleukin này trong việc nghiên cứu chức năng của chúng trong hệ miễn dịch.

Từ khóa


Tài liệu tham khảo

10.1146/annurev.iy.01.040183.001515

10.1146/annurev.iy.02.040184.001535

10.1146/annurev.iy.03.040185.001025

10.1146/annurev.iy.04.040186.000305

10.1038/284316a0

10.1038/302305a0

10.1038/307233a0

10.1038/309763a0

10.1038/312458a0

10.1038/319640a0

10.1038/324070a0

10.1038/324073a0

10.1093/nar/11.13.4307

10.1073/pnas.81.4.1070

10.1126/science.3923623

10.1073/pnas.83.7.2061

10.1016/0092-8674(85)90182-5

10.1093/nar/11.3.687

10.1073/pnas.80.15.4654

10.1002/j.1460-2075.1986.tb04531.x

10.1128/MCB.1.6.486

Campo M. S., 1985, DNA cloning volume II: a practical approach, 213

10.1128/MCB.3.6.1108

10.1002/j.1460-2075.1985.tb02322.x

Maniatis T., 1982, Molecular Cloning: A Laboratory Manual

10.1002/j.1460-2075.1984.tb01813.x

10.1073/pnas.78.3.1527

10.4049/jimmunol.123.4.1548

Jaichill J. L., 1969, J. Virol., 4, 549, 10.1128/jvi.4.5.549-553.1969

Lowy D. R., 1978, J. Virol., 26, 291, 10.1128/jvi.26.2.291-298.1978

Lee J. C., 1982, J. Immunol., 128, 2393, 10.4049/jimmunol.128.6.2393

10.4049/jimmunol.120.6.2027

10.1084/jem.150.6.1510

Koyasu S., 1985, J. Immunol., 134, 3130, 10.4049/jimmunol.134.5.3130

10.1038/272624a0

10.1038/302340a0

10.4269/ajtmh.1980.29.1089

10.1002/eji.1830150611

10.1002/eji.1830060812

10.1111/j.1600-065X.1979.tb00289.x

Harada N., 1985, J. Immunol., 134, 3944, 10.4049/jimmunol.134.6.3944

10.1016/0022-2836(81)90321-1

Hamer D. H., 1982, J. Mol. Appl. Genet., 1, 273

10.1073/pnas.76.8.3755

10.1073/pnas.79.13.4030

10.1016/0092-8674(83)90544-5

10.1126/science.6251549

10.1073/pnas.78.4.2072

10.1073/pnas.83.6.1670

10.1016/0092-8674(86)90341-7

10.1016/0092-8674(85)90285-5

10.1038/329449a0

10.1111/j.1600-065X.1987.tb01179.x

10.1002/j.1460-2075.1987.tb02702.x

Thông tin
Thông tin xuất bản

European Journal of Immunology

Tập 18 Số 1

97-104

Thông tin tác giả