Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Phân tích điện miễn dịch của các kháng nguyên Pseudo-nitzschia multiseries và P. pungens được nhận diện bởi các kháng thể nhắm vào tế bào nguyên vẹn
Tóm tắt
Các kháng thể polyclonal riêng biệt trước đây đã được phát triển nhằm chống lại Pseudonitzschia multiseries sản xuất axit domoic (=Pseudonitzschia pungens f.multiseries) và P. pungens không gây độc (=P. pungens f.pungens). Các kháng thể này liên kết với bề mặt của các diatom như được chỉ ra qua các nghiên cứu miễn dịch huỳnh quang. Ở đây, chúng tôi xem xét bản chất phân tử của các kháng nguyên thông qua phân tích blotting Western (điện miễn dịch blotting). Các kháng nguyên chính cho cả hai kháng thể polyclonal di chuyển dưới dạng các dải khuếch tán có trọng lượng phân tử cao, chủ yếu vẫn ở trong gel chồng, sử dụng hệ thống SDS-PAGE. Các kháng thể được chuẩn bị chống lại P. multiseries đánh dấu mạnh mẽ các kháng nguyên trọng lượng phân tử cao của tất cả các chủng P. multiseries được kiểm tra và cho thấy phản ứng rất ít đối với các chiết xuất P. pungens trên các blot Western. Các kháng thể P. pungens đánh dấu mạnh các kháng nguyên trọng lượng phân tử cao của P. pungens và nhạt màu đánh dấu một vài kháng nguyên P. multiseries. Tính chọn lọc của các kháng thể đối với các loài tương ứng của chúng tương quan với kết quả của các thí nghiệm miễn dịch huỳnh quang, cho thấy rằng các kháng nguyên được nghiên cứu trong nghiên cứu này chịu trách nhiệm cho việc đánh dấu chọn lọc trong các nghiên cứu miễn dịch huỳnh quang. Độ di động điện di và việc gắn kết kháng thể của các kháng nguyên không bị thay đổi bởi sự tiêu hóa protein của các hạt tế bào. Tuy nhiên, việc phá hủy carbohydrate trong các hạt tế bào bằng cách điều trị bằng acid định kỳ dẫn đến mất mát kháng nguyên. Các dữ liệu này cho thấy rằng các kháng nguyên chính của P. multiseries độc và P. pungens không độc là các polysaccharide trọng lượng phân tử cao (>100kDa) nằm trên bề mặt của các diatom này.
Từ khóa
Tài liệu tham khảo
Adair WS, Monk BC, Cohen R, Hwang C, Goodenough UW (1982) Sexual agglutinins from theChlamydomonas flagellar membrane: partial purification and characterization. J. biol. Chem. 257: 4593–4602.
Anderson DM (1995) Identification of harmful algal species using molecular probes: an emerging perspective. In Lassus P, Arzul G, Erard E, Gentien P, Marcaillou C (eds), Harmful Algal Blooms. Lavoisier, Intercept Ltd, Paris, 3–13.
Anderson DM, Kulis DM, Cosper EM (1988) Immunofluorescent detection of the brown tide organism,Aureococcus anophagefferens. In Cosper EM, Bricelj VM, Carpenter EJ (eds) Novel Phytoplankton Blooms: Causes and Impacts of Recurrent Brown Tides and Other Unusual Blooms. Springer-Verlag, New York, 213–228.
Bates SS, Bird CJ, de Freitas ASW Foxall R, Gilgan M, Hanic LA, Johnson GR, McCulloch AW Odense P, Pocklington R, Quilliam MA, Sim PG, Smith JC, Subba Rao DV, Todd ECD, Walter JA, Wright JLC (1989) Pennate diatomNitzschia pungens as the primary source of domoic acid, a toxin in shellfish from eastem Prince Edward Island, Canada. Can. J. Fish. aquat. Sci. 46: 1203–1215.
Bates SS, Léger C, Keafer BA, Anderson DM (1993) Discrimination between domoic-acid-producing and non-toxic forms of the diatomPseudonitzschia pungens using immunofluorescence. Mar. Ecol. Progr. Ser. 100: 185–195.
Bradford MM (1976) A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein using the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 72: 248–254.
Buck KR, Uttal-Cooke L, Pilskaln CH, Roelke DL, Villac MC, Fryxell GA, Cifuentes L, Chavez FP (1992) Autecology of the diatomPseudonitzschia australis Frenguelli, a domoic acid producer, from Monterey Bay, California. Mar. Ecol. Progr. Ser. 84: 293–302.
Couch RB, Kasel JA (1983) Immunity to influenza in man. Annu. Rev. Microbiol. 37: 529–549.
Douglas DJ, Landry D, Douglas SE (1994) Genetic relatedness of toxic and nontoxic isolates of the marine pennate diatomPseudonitzschia (Bacillariophyceae): phylogenetic analysis of 18S rRNA sequences. Nat. Toxins 2: 166–174.
Fliermans CB, Schmidt EL (1977) Immunofluorescence for autecological study of a unicellular blue-green alga. J. Phycol. 13: 361–368.
Fritz L (1992) The use of cellular probes in studying marine phytoplankton. Korean J. Phycol. 7: 319–324.
Fryxell GA, Reap ME, Valencic DL (1990)Nitzschia pungens Grunow f.multiseries Hasle: observations of a known neurotoxic diatom. Beih. Nova Hedwigia 100: 171–188.
Guillard RRL (1975) Culture of phytoplankton for feeding marine invertebrates. In Smith WL, Chanley MH (eds) Culture of Marine Invertebrate Animals. Plenum Press, New York, 181–194.
Hasle GR (1995)Pseudo-nitzschia pungens andP. multiseries (Bacillariophyceae): nomenclatural history, morphology, and distribution. J. Phycol. 31: 428–435.
Hoagland KD, Rosowski JR, Gretz MR, Roemer SC (1993) Diatom extracellular polymeric substances: function, fine structure, chemistry, and physiology. J. Phycol. 29: 537–566.
Jones JL, Callow JA, Green JR (1990) The molecular nature ofFucus serratus sperm antigens recognised by monoclonal antibodies FS1 and FS12. Planta 182: 64–71.
Laemmli UK (1970) Cleavage of structural protein during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 227: 680–685.
Lundholm N, Skov J, Pocklington R, Moestrup Ø (1994) Domoic acid, the toxic amino acid responsible for amnesic shellfish poisoning, now inPseudonitzschia seriata (Bacillariophyceae) in Europe. Phycologia 33: 475–478.
Manhart JR, Fryxell GA, Villac C, Segura LY (1995)Pseudonitzschia pungens andP. multiseries (Bacillariophyceae): nuclear ribosomal DNAs and species differences. J. Phycol. 31: 421–427.
Martin JL, Haya K, Burridge LE, Wildish DJ (1990)Nitzschia pseudodelicatissima — a source of domoic acid in the Bay of Fundy, eastern Canada. Mar. Ecol. Progr. Ser. 67: 177–182.
Nagasaki K, Uchida A, Ishida Y (1991) A monoclonal antibody which recognizes the cell surface of red tide algaGymnodinium nagasakiense. Nippon Suisan Gakkaishi 57: 1211–1214.
Pauley KE, Fritz L, Cormier PG, O'Neil D, Leggiadro C, Smith JC (1994) The extent of tagging ofPseudonitzschia pungens cells by the fluorescently labelled lectin FITC-WGA in relation to growth rate and domoic acid production. In Forbes JR (ed.) Proceedings of the Fourth Canadian Workshop on Harmful Marine Algae. Can. Tech. Rep. Fish. aquat. Sci. 2016: 29 (abstract).
Rhodes L, White D, Atkinson M (1996)Pseudo-nitzschia species isolated from New Zealand coastal waters: domoic acid productionin vitro and links with shellfish toxicity. In Proceedings of the Seventh International Conference on Toxic Phytoplankton, Sendai, Japan, July 1995 (in press).
Sawayama S, Sako Y, Ishida Y (1993) Inhibitory effects of concanavalin A and tunicamycin on sexual attachment ofAlexandrium catenella (Dinophyceae). J. Phycol. 29: 189–190.
Schmidt W, Drews G, Weckesser J, Fromme I, Borowiak D (1980) Characterization of the lipopolysaccharides from eight strains of the cyanobacteriumSynechococcus. Arch. Microbiol. 127: 209–215.
Scholin CA, Villac MC, Buck KR, Krupp KM, Powers DA, Fryxell GA, Chavez FP (1994) Ribosomal DNA sequences discriminate among toxic and non-toxicPseudonitzschia species. Nat. Toxins 2: 152–165.
Todd ECD (1993) Domoic acid and amnesic shellfish poisoning — a review. J. Food Protection 56: 69–83.
Towbin H, Staehelin T, Gordon J (1979) Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets; procedure and some applications. Proc. nat. Acad. Sci. USA 76: 4350–4354.
Uchida A, Nagasaki K, Hiroishi S, Ishida Y (1989) The application of monoclonal antibodies to an identification ofChattonella marina andChattonella antiqua. Nippon Suisan Gakkaishi 55: 721–725.
Villareal TA, Roelke DL, Fryxell GA (1994) occurrence of the toxic diatomNitzschia pungens f.multiseries in Massachusetts Bay, Massachusetts, USA. Mar. environ. Res. 37: 417–423.
Wood AM, Shapiro LM, Bates SS (eds) (1994) Domoic acid — Final Report of the Workshop (second edition). Oregon Sea Grant, Oregon State University, Corvallis, ORESU-W-94-001.