Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Xác định trực tiếp loài nấm dermatophyte gây bệnh phổ biến trong mẫu bệnh phẩm bằng phương pháp PCR bán tổn hợp và đa hình chiều dài đoạn cắt
Tóm tắt
Tìm kiếm một phương pháp sinh học phân tử nhanh chóng và đáng tin cậy để xác định các loài nấm dermatophyte gây bệnh phổ biến từ các mẫu lâm sàng. DNA gen được chiết tách từ các chủng nấm dermatophyte phổ biến và một phần của mỗi mẫu bệnh phẩm dương tính qua kính hiển vi. Các vùng không mã hóa giữa các gene của DNA ribosome (ITS) được khuếch đại bằng PCR bán tổn hợp (snPCR) với ba mồi tổng hợp (NS5, ITS1 và ITS4) cho nấm. Các sản phẩm khuếch đại được cắt bởi hai endonuclease hạn chế (BciT130 I, Dde I), phương pháp đa hình chiều dài đoạn cắt (RFLP). Phần còn lại của mỗi mẫu bệnh phẩm được nuôi cấy trên môi trường Sabouraud’s Agar. Sau đó, kết quả của RFLP được so sánh với kết quả nuôi cấy truyền thống. Sự phân cắt của bảy loài nấm dermatophyte phổ biến tạo ra bảy kiểu phân cắt khác nhau. Các kiểu phân cắt của 17 mẫu lâm sàng đã phù hợp, tương ứng, với các chủng được nuôi cấy, và 14 kiểu trong số 17 mẫu đã hoàn toàn khớp với kết quả nuôi cấy. Mức độ trùng khớp là 100.0%. Phân tích snPCR-RFLP các vùng không mã hóa giữa các gene của DNA ribosome là một phương pháp có giá trị về độ chính xác và rõ ràng để xác định loài của nấm dermatophyte phổ biến từ các mẫu lâm sàng.
Từ khóa
#nấm dermatophyte #PCR bán tổn hợp #đa hình chiều dài đoạn cắt #mẫu bệnh phẩm #phân tích di truyềnTài liệu tham khảo
Harmsen D, Schwinn A, Bröcker EB et al. Molecular differentiation of dermatophyte fungi. Mycoses 1999;42:67–70.
Jackson J, Barton C, Evans E, et al. Species identification and strain differentiation of dermatophyte fungi by analysis of ribosomal-DNA intergenic spacer regions. J Clin Microbiol 1999;37:931–6.
Kong X, Yang G, Jin L et al. Molecular determination of dermatophyte fungi using arbitrarily primed polymerase chain reaction. Chin J Dermatol 2001;34:352–4.
Sun X, Yang G, Li W et al. Rapid identification of pathogenic fungi causing Onychomycosis from nial tissue using arbitrarily primed polymerase chain reaction. Clin J Mycol 2007;April 2(2):89.
Xiliang C. Medical molecular biology. People’s Medical Publishing House, 2003; p.186.
Pierre C, Lecossier D, Boussougant Y et al. Use of reamplification protein of Mycobacterium tuberculosis in clinical samples by amplification of DNA. J Clin Microbiol 1991;29:712.
Guo J, Tang Y, Zhang T et al. Detection of Mycoplasma pneumonia by nested polymerase chain reaction. J Zhongshan Medical University 1997;18:229–31.
Stephane C, Claudine S, Samia H et al. Detection of cryptosporidium and identification to the species level by nested PCR and restriction fragment length polymorphism. J Clin Microbiol 2005;43:1017–23.
Makimura K, Tamura Y, Mochizuki T et al. Phylogenetic classification and species identification of dermatophyte strains based on DNA sequences of nuclear ribosomal internal transcribed spacer 1 regions. J Clin Microbiol 1999;37:920–4.
Wang Q, Yi Z, Li H et al. Homology analysis of 18S–28SrDNA of common dermatophytes. Chin J Microbiol Immunol 2006;26:365–8.
Shin JH, Sung JH, Park SJ et al. Species identification and strain differentiation of dermatophyte fungi using polymerase chain reaction amplification and restriction enzyme analysis. J Am Acad Dermatol 2003 Jun;48(6):857–65.