Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Phát hiện DNA của Chlamydia trachomatis trong dịch khớp: đánh giá độ nhạy của các phương pháp chiết xuất DNA và hệ thống khuếch đại khác nhau
Tóm tắt
Phản ứng chuỗi polymerase (PCR) và phản ứng chuỗi ligase (LCR) được sử dụng trong nghiên cứu để phát hiện Chlamydia trachomatis (C. tr.) trong dịch khớp (SF). Tuy nhiên, hiện không có hệ thống tiêu chuẩn hoá cho việc chẩn đoán trong thực hành lâm sàng, do đó, nghiên cứu này nhằm xác định phương pháp sinh học phân tử phù hợp nhất để phát hiện C. tr. từ SF. Các mẫu dịch khớp đã được bổ sung C. tr. các thể đầu (EB) và các tế bào đơn nhân máu ngoại vi người (PBMo) bị nhiễm C. tr. liên tục trong ống nghiệm để đánh giá độ nhạy của các phương pháp và thử nghiệm sinh học phân tử khác nhau. Năm phương pháp chiết xuất DNA khác nhau đã được thử nghiệm: 1) Phân hủy kiềm, 2) Bộ chiết xuất gel QIAex II® + CTAB, 3) Chiết xuất Chelex®, 4) Bộ QIAmp Tissue® và 5) Bộ QIAmp DNA Stool®. Tất cả các mẫu chích xuất DNA đều được đưa vào 5 hệ thống khuếch đại DNA khác nhau để phát hiện DNA của C. tr. trong các mẫu dịch khớp đã được bổ sung: hai PCR nhắm vào C. tr. -omp1-, một PCR nhắm vào plasmid của C. tr., một PCR nhắm vào RNA 16s của C. tr., và một LCR có sẵn trên thị trường (LCX®, phòng thí nghiệm Abbott). Trong các mẫu dịch khớp đã được bổ sung C. tr.-EB và C. tr.-PBMo, phân hủy kiềm, phát hiện 1 C. tr.-EB/ml SF, 0,1 C. tr.-PBMo/ml SF và bộ chiết xuất gel QIAmp® + CTAB phát hiện 0,1 C. tr. -EB/ml SF, 1 C. tr.-PBMo/ml đã cho phép phát hiện nhạy nhất của sinh vật này khi kết hợp với PCR C. tr.-omp1-(152 bp). Độ nhạy giảm ở tất cả các phương pháp sau khi lưu trữ DNA của loạt pha loãng C. tr. ở -20°C trong 4 tháng ít nhất là một giai đoạn log. Độ nhạy khi phát hiện DNA của C. tr. từ SF phụ thuộc rất lớn vào phương pháp chiết xuất DNA và hệ thống phát hiện được áp dụng. Phân hủy kiềm cũng như bộ chiết xuất gel QIAmp® + CTAB kết hợp với PCR C. tr.-omp1 - (152 bp) đã phát triển trở thành các phương pháp nhạy nhất để xác định C. tr. trong các pha loãng tuần tự.
Từ khóa
#Chlamydia trachomatis #phản ứng chuỗi polymerase #dịch khớp #phương pháp chiết xuất DNA #độ nhạy phát hiệnTài liệu tham khảo
Zeidler H, Kuipers JG, Köhler L: Chlamydia-induced arthritis. Curr Opin Rheumatol. 2004, 16: 380-392. 10.1097/01.bor.0000126150.04251.f9.
Hammer M, Nettelnbreker E, Hopf S, Schmitz E, Pörschke K, Zeidler H: Chlamydial rRNA in the joint of patients with Chlamydia induced arthritis and indifferentiated arthritis. Clin Exp Rheumatol. 1992, 10: 63-66.
Keat A, Dixey J, Soonex C, Thomas B, Osdorne M, Taylor-Robinson D: Chlamydia trachomatis and reactive arthritis: the missing link. Lancet. 1987, 1: 72-74. 10.1016/S0140-6736(87)91910-6.
Nanagara R, Li F, Beutler A, Hudson A, Schumacher H: Alteration of Chlamydia trachomatis biologic behavior in synovial membranes. Arthritis Rheum. 1995, 38: 1410-1417. 10.1002/art.1780381008.
Nanagara R, Duray PH, Schumacher HR: Ultrastructural demonstration of spirochetal antigens in synovial fluid and synovial membrane in chronic Lyme disease: possible factors contributing to persistence of organisms. Hum Pathol. 1996, 27: 1025-1034. 10.1016/S0046-8177(96)90279-8.
Kuipers JG, Scharmann K, Wollenhaupt J, Nettelnbreker E, Hopf S, Zeidler H: Sensitivities of PCR, MicroTrak, ChlamydiaEIA, IDEIA, and PACE 2 for purified Chlamydia trachomatis elementary bodies in urine, peripheral blood, peripheral blood leukocytes, and synovial fluid. J Clin Microbiol. 1995, 33: 3186-3190.
Taylor-Robinson D, Gilroy CB, Thomas BJ, Keat AC: Detection of Chlamydia trachomatis DNA in joints of reactive arthritis patients by polymerase chain reaction. Lancet. 1992, 340: 81-82. 10.1016/0140-6736(92)90399-N.
Kuipers JG, Andresen J, Kohler L, Schnarr S, Putschky N, Zeidler H, Wollenhaupt J: Evaluation of amplicor chlamydia PCR and LCX chlamydia LCR to detect Chlamydia trachomatis in synovial fluid. Clin Exp Rheumatol. 2002, 20: 185-192.
Freise J, Gerard HC, Bunke T, Whittum-Hudson JA, Zeidler H, Kohler L, Hudson AP, Kuipers JG: Optimized sample DNA preparation for detection of Chlamydia trachomatis in synovial tissue by polymerase chain reaction and ligase chain reaction. Ann Rheum Dis. 2001, 60: 140-145. 10.1136/ard.60.2.140.
Branigan PJ, Gerard HC, Hudson AP, Schumacher HR, Pando J: Comparison of synovial tissue and synovial fluid as the source of nucleic acids for detection of Chlamydia trachomatis by polymerase chain reaction. Arthritis Rheum. 1996, 39: 1740-1746. 10.1002/art.1780391018.
Li F, Bulbul R, Schumacher HR, Kieber-Emmons T, Callegari PE, Von Feldt JM, Norden D, Freundlich B, Wang B, Imonitie V, Chang CP, Nachamkin I, Weiner DB, Williams WV: Molecular detection of bacterial DNA in venereal-associated arthritis. Arthritis Rheum. 1996, 39: 950-958. 10.1002/art.1780390612.
Nikkari S, Puolakkainen M, Yli-Kerttula U, Luukkainen R, Lehtonen OP, Toivanen P: Ligase chain reaction in detection of Chlamydia DNA in synovial fluid cells. Br J Rheumatol. 1997, 36: 763-765. 10.1093/rheumatology/36.7.763.
Pacheco-Tena C, Alvarado DLB, Lopez-Vidal Y, Vazquez-Mellado J, Richaud-Patin Y, Amieva RI, Llorente L, Martínez A, Zúñiga J, Cifuentes-Alvarado M, Burgos-Vargas R: Bacterial DNA in synovial fluid cells of patients with juvenile onset spondyloarthropathies. Rheumatology. 2001, 40: 920-927. 10.1093/rheumatology/40.8.920.
Schnarr S, Putschky N, Jendro MC, Zeidler H, Hammer M, Kuipers JG, Wollenhaupt J: Chlamydia and Borrelia DNA in synovial fluid of patients with early undifferentiated oligoarthritis: results of a prospective study. Arthritis Rheum. 2001, 44: 2679-2685. 10.1002/1529-0131(200111)44:11<2679::AID-ART447>3.0.CO;2-C.
Taylor-Robinson D, Gilroy CB, Thomas BJ, Keat AC: Detection of Chlamydia trachomatis DNA in joints of reactive arthritis patients by polymerase chain reaction. Lancet. 1992, 340: 81-82. 10.1016/0140-6736(92)90399-N.
Wollenhaupt J, Schnarr S, Kuipers JG: Bacterial antigens in reactive arthritis and spondarthritis. Rational use of laboratory testing in diagnosis and follow-up. Baillieres Clin Rheumatol. 1998, 12: 627-647. 10.1016/S0950-3579(98)80041-1.
Kuipers JG, Nietfeld L, Dreses-Werringloer U, Koehler L, Wollenhaupt J, Zeidler H: Optimized sample preparation of synovial fluid for detection of Chlamydia trachomatis DNA by polymerase chain reaction. Ann Rheum Dis. 1999, 58: 103-108. 10.1136/ard.58.2.103.
Bas S, Griffais R, Kvien TK, Glennas A, Melby K, Vischer TL: Amplification on plasmid and chromosome Chlamydia DNA in synovial fluid of patients with reactive arthritis and undifferentiated seronegative ologoarthropathies. Arthritis Rheum. 1995, 38: 1005-1013. 10.1002/art.1780380718.
Schmitz E, Nettelnbreker E, Zeidler H, Hammer M, Manor E, Wollenhaupt J: Intracellular persistence of chlamydial major outer-membrane protein, lipopolysaccharide and ribosomal RNA after non-productive infection of human monocytes with Chlamydia trachomatis serovar K. J Med Microbiol. 1993, 38: 278-285. 10.1099/00222615-38-4-278.
Gérard H, Köhler L, Branigan P, Zeidler H, Schumacher H, Hudson A: Vialbility and gene expression in Chlamydia trachomatis during persitent infection of cultured human monocytes. Med Microbiol Immunol. 1998, 187: 115-120. 10.1007/s004300050082.
Köhler L, Nettelnbreker E, Hudson A, Ott N, Gérard H, Branigan P, Schumacher HR, Drommer W, Zeidler H: Ultrastructual and molecular analysis of the persistence of Chlamydia trachomatis (serovar K) in human monocytes. Microb Pathog. 1997, 22: 133-142. 10.1006/mpat.1996.0103.
Priem S, Rittig MG, Kamradt T, Burmester GR, Krause A: An optimized PCR leads to rapid and highly sensitive detection of Borrelia burgdorferi in patients with Lyme borreliosis. J Clin Microbiol. 1997, 35: 685-690.
Wilkinson N, Kingsley G, Jones H, Sieper J, Braun J, Ward M: Detection of DNA from a range of bacterial species in the joints of patients with a variety of arthitides using a nested broad- range polymerase chain reaction. Rheumatology (Oxford). 1999, 38: 260-266. 10.1093/rheumatology/38.3.260.
Bobo L, Coutlee F, Yolken R, Quinn T, Viscidi R: Diagnosis of Chlamydia trachomatis cervical infection by detection of amplified DNA with an enzyme immunoassay. J Clin Microbiol. 1990, 28: 1968-1973.
Jensen JS, Björnelius E, Dohn B, Lidbrink P: Comparison of first void urin and urogenital swab specimens for detetcion of Mycoplasma genitalium and Chlamydia trachomatis by polymerase chain reaction in patients attending a sexually transmitted disease clinic. Sex transm dis. 2004, 31: 499-507. 10.1097/01.olq.0000135992.98883.e4.
Bas S, Ninet B, Delaspre O, Vischer TL: Evaluation of commercially available tests for Chlamydia nucleic acid detection in synovial fluid of patients. Br J Rheumatol. 1997, 36: 198-202. 10.1093/rheumatology/36.2.198.
Gérard H, Branigan P, Schumacher H, Hudson A: Synovial Chlamydia trachomatis in patients with reactive arthritis/Reiter's syndrome are viable but show aberant gene expression. J Rheumatol. 1998, 25: 734-742.
Gérard H, Whittum-Hudson J, Hudson A: Genes required for assembly of the protein synthetic system in Chlamydia trachomatis are expressed early in elementary to reticulate body transformation. Mol Gen Genet. 1997, 255: 637-643. 10.1007/s004380050538.
Zeidler H, Schumacher HR: Chlamydia-induced arthritis. The spondylarthritides. Edited by: Calin A, Taurog JD. 1998, Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press, 69-96.
Schumacher HR, Magge S, Cherian PV, Sleckman J, Rothfuss S, Clayburne G, Sieck M: Light and electron microscopic studies on the synovial membrane in Reiter's syndrome. Immunocytochemical identification of chlamydial antigen in patients with early disease. Arthritis Rheum. 1988, 31: 937-946. 10.1002/art.1780310801.