Bảo quản lạnh giác mạc: tốc độ làm lạnh thấp cải thiện sự sống sót chức năng của nội mô sau khi đông lạnh và rã đông

Mục tiêu. Nghiên cứu ảnh hưởng của tốc độ làm lạnh thấp đến chức năng và hình thái của nội mô giác mạc đông lạnh bằng propane-1,2-diol (PROH). Phương pháp. Gạo giác mạc thỏ, được gắn trên vòng hỗ trợ, đã được tiếp xúc với 1,4mol/l (10% v/v) PROH, được gài để khởi đầu quá trình đông lạnh, và được làm lạnh ở tốc độ 0,2 hoặc 1°C/phút đến −80°C. Giác mạc được đông lạnh trong môi trường lỏng hoặc treo trong không khí. Sau khi được giữ qua đêm trong nitơ lỏng, giác mạc được làm ấm ở tốc độ 1 hoặc 20°C/phút. Sau khi loại bỏ từng bước chất bảo vệ đông lạnh, khả năng của nội mô trong việc kiểm soát độ ẩm giác mạc một cách chủ động được theo dõi trong quá trình tưới máu ở nhiệt độ bình thường. Hình thái được đánh giá sau khi nhuộm với trypan blue và alizarin red S, và bằng vi hình ảnh trong quá trình tưới máu. Kết quả. Sự sống sót chức năng chỉ đạt được sau quá trình làm lạnh chậm (0,2°C/phút) với giác mạc chìm trong môi trường bảo vệ đông lạnh, và quá trình làm ấm nhanh (20°C/phút). Những điều kiện này cũng tạo ra hình thái tốt nhất sau khi đông lạnh và rã đông. Kết luận. Tốc độ làm lạnh thấp hơn những gì thường được áp dụng cho giác mạc đã cải thiện sự sống sót chức năng của nội mô. Kết quả này phù hợp với các quan sát trước đây cho thấy lợi ích của tốc độ làm lạnh thấp đối với các lớp tế bào đơn [CryoLetters 17 (1996) 213–218].