Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Biến dị khu vực bảo tồn (CoRAP), Kỹ thuật đánh dấu mới cho định gen thực vật trong Salvia miltiorrhiza
Tóm tắt
Salvia miltiorrhiza (SM), một loại thảo dược phổ biến ở Trung Quốc, được trồng ở nhiều vùng khác nhau tại Trung Quốc. Việc xác định SM được trồng ở các tỉnh khác nhau của Trung Quốc gặp khó khăn,do đó việc định gen những bộ sưu tập này sẽ rất có giá trị. Dựa trên các kỹ thuật đa hình khuếch đại liên quan đến trình tự và đa hình khuếch đại khu vực mục tiêu, một kỹ thuật đánh dấu phân tử mới dựa trên PCR được gọi là biến dị khu vực bảo tồn (CoRAP) được báo cáo trong nghiên cứu này để định gen SM. Kỹ thuật CoRAP dựa trên việc sử dụng hai mồi: mồi cố định và mồi ngẫu nhiên. Mồi cố định được rút ra từ các trình tự EST mục tiêu đã được lưu trữ trong Genbank; trong khi đó, trình tự lõi (CACGC) của mồi ngẫu nhiên là một khu vực bảo tồn có mặt trong hầu hết các intron. Trong nghiên cứu hiện tại, chúng tôi đã sử dụng CoRAP để định gen SM từ các nguồn gốc địa lý khác nhau. Phản ứng khuếch đại PCR được thực hiện trong 30 chu kỳ với nhiệt độ gắn kết là 52°C. Mỗi phản ứng PCR đã tạo ra từ 30–50 đoạn có kích thước từ 50 đến 1.000 bp. Việc định gen DNA của SM bằng CoRAP đã thành công. Phương pháp định gen mới này nhanh chóng, hiệu quả và có thể tái tạo.
Từ khóa
#Salvia miltiorrhiza #CoRAP #định gen #polymorphism #kỹ thuật đánh dấu phân tử.Tài liệu tham khảo
Abd-Elazem IS, Chen HS, Bates RB, Huang RC. Isolation of two highly potent and non-toxic inhibitors of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) integrase from Salvia miltiorrhiza. Antiviral Res. 2002;55:91–106. doi:10.1016/S0166-3542(02)00011-6.
Botstein D, White RL, Skolnick M, Davis RW. Construction of a genetic linkage map in man using restriction fragment length polymorphisms. Am J Hum Genet. 1980;32:314–31.
Cheng TO. Cardiovascular effects of Danshen. Int J Cardiol. 2007;121:9–22. doi:10.1016/j.ijcard.2007.01.004.
Hsu YC, Lin YL, Chiu YT, et al. Antifibrotic effects of Salvia miltiorrhiza on dimethylnitrosamine-intoxicated rats. J Biomed Sci. 2005;12:185–95. doi:10.1007/s11373-004-8167-7.
Hu J, Vick BA. Target region amplification polymorphism: a novel marker technique for plant genotyping. Plant Mol Biol Rep. 2003;21:289–94. doi:10.1007/BF02772804.
Janssen P, Coopman R, Huys G, Swings J, Bleeker M, Vos P, et al. Evaluation of the DNA fingerprinting method AFLP as an new tool in bacterial taxonomy. Microbiology 1996;142(Pt 7):1881–93.
Li G, Quiros CF. Sequence-related amplified polymorphism (SRAP), a new marker system based on a simple PCR reaction: its application to mapping and gene tagging in Brassica. Theor Appl Genet. 2001;103:455–61. doi:10.1007/s001220100570.
Litt M, Luty JA. A hypervariable microsatellite revealed by in vitro amplification of a dinucleotide repeat within the cardiac muscle actin gene. Am J Hum Genet. 1989;44:397–401.
Moore SS, Sargeant LL, King TJ, Mattick JS, Georges M, Hetzel DJ. The conservation of dinucleotide microsatellites among mammalian genomes allows the use of heterologous PCR primer pairs in closely related species. Genomics 1991;10:654–60. doi:10.1016/0888-7543(91)90448-N.
Tautz D. Hypervariability of simple sequences as a general source for polymorphic DNA markers. Nucleic Acids Res. 1989;17:6463–71. doi:10.1093/nar/17.16.6463.
Vos P, Hogers R, Bleeker M, Reijans M, van de Lee T, Hornes M, et al. AFLP: a new technique for DNA finger printing. Nucleic Acids Res. 1995;23:4407–14. doi:10.1093/nar/23.21.4407.
Vuylsteke M, Peleman JD, van Eijk MJ. AFLP technology for DNA fingerprinting. Nat Protocols. 2007;2:1387–98. doi:10.1038/nprot.2007.175.
Welsh J, McClelland M. Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers. Nucleic Acids Res. 1990;18:7213–8. doi:10.1093/nar/18.24.7213.
Williams JG, Kubelik AR, Livak KJ, Rafalski JA, Tingey SV. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers. Nucleic Acids Res. 1990;18:6531–5. doi:10.1093/nar/18.22.6531.
Zhou L, Zuo Z, Chow MS. Danshen: an overview of its chemistry, pharmacology, pharmacokinetics, and clinical use. J Clin Pharmacol. 2005;45:1345–59. doi:10.1177/0091270005282630.