Thư viện đột biến transposon toàn diện của Pseudomonas aeruginosa

\nĐã phát triển các công nghệ để tạo ra thư viện đột biến chèn transposon được định nghĩa theo trình tự, trong đó mỗi chủng được duy trì riêng rẽ. Phân tích hình thái của các thư viện như vậy có thể cung cấp sự nhận diện gần như hoàn chỉnh các gene không thiết yếu cần cho bất kỳ quá trình nào có thể thiết lập một màn hình phù hợp. Phương pháp này được áp dụng cho\nPseudomonas aeruginosa\n , một mầm bệnh cơ hội với bộ gen 6,3 Mb. Thư viện này bao gồm 30.100 đột biến được định nghĩa theo trình tự, tương ứng trung bình với năm lần chèn mỗi gene. Khoảng 12% các gene dự đoán trong sinh vật này không có chèn; nhiều gene này có khả năng cần thiết cho sự phát triển trên môi trường phong phú. Dựa trên các phân tích thống kê và so sánh tin học sinh học với các gene thiết yếu đã biết trong\nE. coli\n, chúng tôi ước tính số lượng gene thiết yếu thực tế là 300-400. Sàng lọc bộ sưu tập cho các chủng thiếu hụt trong hai quá trình đa gene được xác định (di động co giật và tăng trưởng dinh dưỡng số lượng lớn) đã xác định được các đột biến tương ứng với hầu hết các gene dự kiến từ các nghiên cứu trước đây. Như vậy, phân tích hình thái học của bộ sưu tập có thể tạo ra danh sách gần như hoàn chỉnh các gene cần thiết cho các hoạt động sinh học đa dạng. Các transposon được sử dụng để tạo ra bộ đột biến có thêm các đặc điểm có thể tạo điều kiện thuận lợi cho các nghiên cứu tiếp theo về biểu hiện gene, định vị protein, tương tác gen và kỹ thuật nhiễm sắc thể.\n