So sánh phương pháp khuếch đại lặp lại telomer (TRAP) với bộ kit phát hiện telomerase TRAP-eze mới

Methods in Cell Science - Tập 18 - Trang 237-248 - 1996
Shawn E. Holt1, James C. Norton1, Woodring E. Wright1, Jerry W. Shay1
1The Department of Cell Biology and Neuroscience, University of Texas Southwestern Medical Center at Dallas, Dallas, USA

Tóm tắt

Telomerase, ribonucleoprotein, được cho là chịu trách nhiệm cho việc duy trì độ dài telomere trong các tế bào bất tử và tế bào ung thư. Một xét nghiệm dựa trên PCR để phát hiện hoạt động telomerase (xét nghiệm TRAP: giao thức khuếch đại lặp lại telomer) đã được phát triển, cho phép phát hiện nhanh chóng và hiệu quả hoạt động telomerase khi số lượng mẫu bị hạn chế. Trong số hàng nghìn khối u người nguyên phát được kiểm tra bằng xét nghiệm TRAP, gần 90% đã cho thấy hoạt động telomerase. Do đó, để phát hiện sớm ung thư và để sàng lọc nhanh chóng các hợp chất và thuốc trong liệu pháp điều trị ung thư, các phương pháp phát hiện hoạt động telomerase đang nhanh chóng phát triển. Bộ kit TRAP-ezeTM mới phát triển từ Oncor, Inc. cho cảm biến cao hơn với thời gian xử lý mẫu giảm, cho phép phát hiện hoạt động telomerase tốt hơn trong một số lượng lớn mẫu. Trong nghiên cứu hiện tại, chúng tôi đã đề cập đến một số khía cạnh kỹ thuật và những hạn chế có tầm quan trọng quyết định đối với tính lặp lại, độ tin cậy và tính đường thẳng của xét nghiệm TRAP tiêu chuẩn và bộ kit TRAP-ezeTM bằng việc sử dụng vật liệu nuôi cấy tế bào và vật liệu lâm sàng.

Từ khóa

#telomerase #TRAP assay #cancer detection #TRAP-eze kit #PCR #human tumors

Tài liệu tham khảo

Allsopp RC, Vaziri H, Patterson C, Goldstein S, Younglai EV, Futcher AB, Greider CW, Harley CB (1992). Telomere length predicts replicative capacity of human fibroblasts. Proc Natl Acad Sci (USA) 89: 10114–10118. Broccolli D, Young JW, de Lange T (1995). Telomerase activity in normal and malignant hematopoietic cells. Proc Natl Acad Sci (USA) 92: 9082–9086. Counter CM, Avillon AA, LeFeuvre CE, Stewart NG, Greider CW, Harley CB, Bacchetti S (1992). Telomere shortening associated with chromosome instability is arrested in immortal cells which express telomerase activity. EMBO J 11: 1921–1929. Counter CM, Botelho FM, Wang P, Harley CB, Bacchetti S (1994). Stabilization of short telomeres and telomerase activity accompany immortalization of Epstein-Barr virus-transformed human B lymphocytes. J Virol 68: 3410–3414. Counter CM, Hirte HW, Bacchetti S, Harley CB (1994). Telomerase activity in human ovarian carcinoma. Proc Natl Acad Sci (USA) 91: 2900–2904. Greider CW, Blackburn EH (1985). Identification of a specific telomere terminal transferase activity inTetrahymena extracts. Cell 43: 405–413. Greider CW, Blackburn EH (1989). A telomeric sequence in the RNA ofTetrahymena telomerase required for telomere repeat synthesis. Nature 337: 331–337. Harley CB, Futcher AB, Greider CW (1990). Telomeres shorten during aging. Nature 345: 458–460. Harris CC (1987). Human tissues and cells in carcinogenesis research. Cancer Res 47: 1–10. Hastie ND, Dempster M, Dunlop MG, Thompson AM, Green DK, Allshire RC (1990). Telomere reduction in human colorectal carcinoma and with ageing. Nature 346: 866–868. Hiyama E, Hiyama K, Yokoyama T, Matsuura Y, Piatyszek MA, Shay JW (1995). Correlation of telomerase activity level with human neuroblastoma outcomes. Nature Medicine 1: 249–257. Hiyama K, Hiyama E, Ishoika S, Yamakido M, Inai K, Gazdar AF, Piatyszek MA, Shay JW (1995). Telomerase activity in small-cell and non-small-cell lung cancers. J Natl Cancer Inst 87: 895–902. Hiyama K, Hirai Y, Kyoizumi S, Akiyama M, Hiyama E, Piatyszek MA, Shay JW, Ishoika S, Yamakido M (1995). Activation of telomerase in human lymphocytes and hematopoietic progenitor cells. J Immuno 155: 3711–3715. Hiyama E, Yokoyama T, Tatsumoto N, Hiyama K, Imamura Y, Murakami Y, Kodama T, Piatyszek M, Shay JW, Matsuura Y (1995). Telomerase activity in gastric cancer. Cancer Res 55: 3258–3262. Hiyama E, Gollahon L, Kataoka T, Kuroi K, Yokoyama T, Gazdar AF, Hiyama K, Piatyszek MA, Shay JW (1996). Telomerase activity in human breast tumors. J Natl Cancer Inst 88: 116–122. Holt SE, Wright WE, Shay JW (1996). Regulation of telomerase activity in immortal cell lines. Molec Cell Biol 16: 2932–2939. Holt SE, Shay JW, Wright WE (1996). Refining the Telomere-Telomerase hypothesis of aging and cancer. Nature Biotech 14: 834–837. Huschtscha LL, Holliday R (1983). Limited and unlimited growth of SV40-transformed cells from human diploid MRC-5 fibroblasts. J Cell Sci 63: 77–99. Kaczorowski T, Furmanek B, Sektas MA (1994). Method for removal of radioactive nucleotides from electrophoretic buffers. BioTechniques 1994; 16: 1030–1031. Kim NW, Piatyszek MA, Prowse KR, Harley CB, West MD, Ho PLC, Coviello GM, Wright WE, Weinrich SL, Shay JW (1994). Specific association of human telomerase activity with immortal cells and cancer. Science 266: 2011–2015. Levy MZ, Allsopp RC, Futcher AB, Greider CW, Harley CB (1992). Telomere end-replication problem and cell aging. J Mol Biol 225: 951–960. Morin GB (1989). The human telomere terminal transferase enzyme is a ribonucleoprotein that synthesizes TTAGGG repeats. Cell 59: 521–529. Norton JC, Piatyszek MA, Wright WE, Shay JW, Corey DR (1996). Inhibition of human telomerase activity by peptide nucleic acids. Nature Biotech 14: 1615–1619. Olovnikov AM (1973). A theory of marginotomy. J Theor Biol 41: 181–190. Piatyszek MA, Kim NW, Weinrich SL, Hiyama K, Hiyama E, Wright WE, Shay JW (1995). Detection of telomerase activity in human cells and tumors by a telomeric repeat amplification protocol (TRAP). Meth Cell Sci 17: 1–15. Sharma HW, Sokoloski JA, Perez JR, Maltese JY, Sartorelli AC, Stein CA, Nichols G, Khaled Z, Telang NT, Narayaman R (1995). Differentiation of immortal cells inhibits telomerase activity. Proc Natl Acad Sci USA 92: 12343–12346. Shay JW, Pereira-Smith OM, Wright WE (1991). A role for both Rb and p53 in the regulation of human cellular senescence. Exp Cell Res 196: 33–39. Shay JW, Wright WE, Werbin H (1991). Defining the molecular mechanisms of human cell immortalization. Biochem Biophys Acta 1072: 1–7. Sommerfeld HJ, Meeker AK, Piatyszek MA, Bova GS, Shay JW, Coffey DS (1995). Telomerase activity: A prevalent marker of malignant human prostate tissue. Cancer Res 56: 218–222. Taylor RS, Ramirez RD, Ogoshi M, Chaffins M, Piatyszek MA, Shay JW (1996). Detection of telomerase activity in malignant and nonmalignant skin conditions. J Invest Dermatol 106: 759–765. Vaziri H, Schächter F, Uchida I, Wei L, Zhu X, Effros R, Cohen D, Harley CB (1993). Loss of telomeric DNA during aging of normal and trisomy 21 human lymphocytes. Am J Hum Genet 52: 661–667. Watson JD (1972). Origin of concatameric T4 DNA. Nature 239: 197–201. Wright WE, Pereira-Smith OM, Shay JW (1989). Reversible cellular senescence: Implications for a two-stage model for the immortalization of normal human diploid fibroblasts. Mol Cell Biol 9: 3088–3092. Wright WE, Shay JW, Piatyszek MA (1995). Modifications of a telomeric repeat amplification protocol (TRAP) result in increased reliability, linearity and sensitivity. Nuc Acids Res 23: 3794–3795. Wright WE, Shay JW (1992). The two-stage mechanism controlling cellular senescence and immortalization. Exp Geron 27: 383–389. Wright WE, Shay JW (1992). Telomere positional effects and the regulation of cellular senescence. Trends Genet 8: 193–197.