Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Đặc trưng của một yếu tố kết tập tiểu cầu mới từ độc tố crotoxin của Crotalus durissus cascavella
Tóm tắt
Trong bài báo này, chúng tôi đã nghiên cứu hoạt động kết tập tiểu cầu của độc tố crotoxin nguyên vẹn và các tiểu phân của nó được tách ra từ nọc độc của Crotalus durissus cascavella. Trong quá trình tinh chế độc tố, sử dụng phương pháp loại bỏ phân tử HPLC, chúng tôi đã phát hiện sự tồn tại của hai hoạt động protease serine khác nhau trong phân đoạn gyroxin và một trong phân đoạn crotoxin, điều này đã kích thích sự kết tập tiểu cầu mạnh mẽ và không hồi phục, bên cạnh sự đông cầm máu. Từ crotoxin, chúng tôi đã tách được PLA2, crotapotin (cả hai phân đoạn này chiếm khoảng 85% tổng số crotoxin) cùng với một phân đoạn nhỏ khác (F20) có hoạt tính protease serine. Sau khi phân đoạn lại bằng phương pháp sắc ký ngược pha HPLC, chúng tôi đã thu được ba phân đoạn khác được gọi là F201, F202 và F203. F202 thu được với mức độ đồng nhất phân tử cao với khối lượng phân tử khoảng 28 kDa và có hàm lượng axit amin axit cao như axit aspartic và axit glutamic. Các axit amin quan trọng khác bao gồm histidine, cysteine và lysine. Protein này thể hiện sự đặc hiệu cao đối với BApNA, có hành vi Michaelis-Menten với Vmax ước tính khoảng 5.64 μM/phút và giá trị Km là 0.58 mM đối với chất nền này. Trong công trình này, chúng tôi đã điều tra khả năng của F202 trong việc phân hủy fibrinogen và quan sát được sự cắt đứt chuỗi α và β. Hoạt động enzyme cũng như hoạt động kết tập tiểu cầu bị ức chế mạnh mẽ khi ủ với TLCK và PMSF, những chất ức chế đặc hiệu của protease serine. Ngoài ra, F202 đã gây kết tập tiểu cầu trong huyết tương rửa và huyết tương giàu tiểu cầu, và trong cả hai trường hợp, TLCK đã ức chế hoạt động của nó. Chuỗi axit amin N-terminal của F202 cho thấy tính đồng nhất cao với các protein tương tự thrombin khác, nhưng khác biệt rõ rệt với gyroxin. Những kết quả này cho thấy crotoxin là một protein có tính không đồng nhất cao, bao gồm PLA2, miễn dịch tương tự thrombin và các phân đoạn khác có thể giải thích sự đa dạng của các hoạt động sinh lý và dược lý của protein này.
Từ khóa
Tài liệu tham khảo
Alexander G., Grothusen J., Zepeda H. and Schwartzman R. J. (1988). Toxicon 26(10): 953–960
Azevedo-Marques M. M., Cupo P., Coimbra T. M., Hering S. E., Rossi M. A. and Laure C. J. (1985). Toxicon 23(4):631–636
Bon C., Changeux J. P., Jeng T. W. and Fraenkel-Conrat H. (1979). Eur. J. Biochem. 99(3):471–481
Bortoleto R. K., Murakami M. T., Watanabe L., Soares A. M. and Arni R. K. (2002). Toxicon 40:1300–1312
Breithaupt H. (1976). Toxicon 14(3):221–233
Cameron D. L. and Tu A. T. (1978). Biophys. Acta. 532(1):147–154
Castro H. C., Silva D. M., Craik C. and Zingali R. B. (2001). Biochim. Biophys. Acta. 1547(2):183–195
Chen T. and Rael E. D. (1997). Int. J. Biochem. Cell Biol. 29:789–799
Dekhil H., Wisner A., Marrakchi N., El Ayeb M., Bon C. and Karoui H. (2003). Biochemistry 42:10609–10618
Fraenkel-Conrat H. and Singer B. (1956). Arch. Biochem. Biophys. 60(1):64–73
Habermann E. and Breithaupt H. (1978). Toxicon 16(1):19–30
Holzer M. and Mackessy S. P. (1996). Toxicon 34(10):1149–1155
Huang, Q. Q., Teng, M. K., and Niu, L. W. (1999). Toxicon, 37(7): 999–1013.
Landucci E. C., Condino-Neto A., Perez A. C., Hyslop S., Corrado A. P., Novello J. C., Marangoni S., Oliveira B., Antunes E. and de Nucci G. (1994). Toxicon 32(2):217–226
Markland F. S. (1991). Thromb. Haemost. 65: 438–443
Markland F. S. (1998). Toxicon 36:1749–1800
Matsui T., Fujimura Y. and Titani K. (2000). Biochimica et Biophysica Acta 1477:146–156
McMullen B. A., Fujikawa K. and Kisiel W. (1989). Biochemistry 28:674–679
Nahas L., Kamiguti A. S. and Barros M. A. R. (1979). Thromb. Haemst. 41: 314–328
Niewiarowski S., Kirby E. P. and Stocker K. (1977). Thromb Res. 10(6):863–869
Ouyang C. and Teng C. M. (1976). Toxin 14:45–49
Ouyang C., Teng T. F. and Huang T. (1992). Toxicon 30:945–966
Pirkle H. (1998). Thromb. Haemost. 79:675–683
Prado-Franceschi J., Brazil O. V. (1981). Toxicon 19(6):875–887
Prado-Franceschi J., Tavares D. Q., Hertel R. and Lobo de Araujo A. (1981). Toxicon 19(5): 661–666
Rosenfeld, G., and Kalen, E.M. (1971). Rev. Paul. Med. 77(4): 149–150.
Schagger, H., and von Jagow, G. (1987). Anal. Biochem. 166(2): 368– 379
Selistre H. S. and Giglio J. R. (1987). Toxicon 25:1135–1144
Serrano S. M. T., Mentele R., Sampaio C. A. M. and Fink E. (1995). Biochemistry 34:7186–7193
Tans G. and Rosing J. (2001) Haemostasis 31(3–6): 225–233
Teng C. M. and Ko F. N. (1988). Thromb. Haemost. 59(2):304–309
Vargaftig B. B., Prado-Franceschi J., Chignard M., Lefort J. and Marlas G. (1980). Eur. J. Pharmacol. 68(4):451–464
Zhang Y., Gao R., Lee W. H., Zhu S. W., Xiong Y. L. and Wang W. Y. (1998). Toxicon 36(1):131–142