Shuiming Guo1, Lei Dong1, Junhua Li1, Yuetao Chen2, Ying Yao1, Rui Zeng1, Nelli Shushakova3, Hermann Haller3, Gang Xu1, Song Rong3
1Department of Nephrology, Division of Internal Medicine, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan, Hubei 430030, China
2Department of Respiratory, Division of Internal Medicine, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan, Hubei 430030, China
3Department of Nephrology, Hannover Medical School, Hannover 30625, Germany
Tóm tắt
Tóm tắtĐặt vấn đềĐại thực bào đóng một vai trò quan trọng trong tổn thương thận do thiếu oxy và hồi phục oxy, nhưng những thay đổi chức năng của đại thực bào trong điều kiện thiếu oxy/hồi phục oxy và cơ chế liên quan vẫn chưa được làm rõ và cần được nghiên cứu thêm.Phương phápẢnh hưởng của việc thiếu oxy/hồi phục oxy lên các đặc tính chức năng của đại thực bào RAW264.7 đã được phân tích thông qua việc phát hiện biểu hiện protein của các yếu tố pro‐viêm TNF‐α và CD80, các yếu tố kháng viêm ARG‐1 và CD206. Ý nghĩa của sự giảm biểu hiện thụ thể hóa chất hướng động C‐X3‐C motif 1 (CX3CR1) trong các đại thực bào thiếu oxy đã được khám phá bằng công nghệ RNA can thiệp nhỏ. Độ tin cậy được đánh giá bằng cách sử dụng kiểm tra t tham số hoặc kiểm tra Mann–Whitney không tham số cho các so sánh giữa hai nhóm, và ANOVA một chiều hoặc kiểm tra Kruskal–Wallis cho các so sánh đa nhóm.Kết quảThiếu oxy/hồi phục oxy đã làm tăng đáng kể biểu hiện protein của các yếu tố pro‐viêm liên quan đến M1 như TNF‐α, CD80 và chemokine C‐X3‐C motif chemokine ligand 1 (CX3CL1)/CX3CR1, và ức chế biểu hiện protein của các yếu tố kháng viêm liên quan đến M2 như ARG‐1 và CD206 theo thời gian trong các tế bào RAW264.7. Tuy nhiên, việc làm tắt CX3CR1 trong các tế bào RAW264.7 bằng RNA can thiệp nhỏ CX3CR1 đã làm giảm đáng kể sự gia tăng biểu hiện protein của TNF‐α (P < 0.05) và CD80 (P < 0.01) và sự ức chế của ARG‐1 (P < 0.01) và CD206 (P < 0.01) do thiếu oxy/hồi phục oxy gây ra. Bên cạnh đó, chúng tôi cũng phát hiện rằng thiếu oxy/hồi phục oxy có thể tăng cường đáng kể khả năng di chuyển (2,2 lần, P < 0.01) và khả năng bám dính (1,5 lần, P < 0.01) của các đại thực bào RAW264.7 so với nhóm đối chứng, và CX3CR1‐siRNA có vai trò ức chế (giảm 40% và 20%, tương ứng). Để làm rõ cơ chế, chúng tôi cho thấy rằng mức độ phosphoryl hóa của ERK (P < 0.01) và tiểu đơn vị p65 của NF‐κB (P < 0.01) trong nhóm tế bào RAW264.7 thiếu oxy/hồi phục oxy tăng lên một cách đáng kể, điều này có thể bị giảm đi do sự giảm biểu hiện CX3CR1 (P < 0.01, cả hai). Các chất ức chế ERK cũng đã chặn đáng kể các tác động của thiếu oxy/hồi phục oxy lên biểu hiện protein của các yếu tố pro‐viêm liên quan đến M1 như TNF‐α, CD80 và các yếu tố kháng viêm liên quan đến M2 như ARG‐1 và CD206. Hơn nữa, chúng tôi thấy rằng môi trường điều kiện từ các đại thực bào phân hóa M1 do thiếu oxy/hồi phục oxy đã tăng đáng kể mức độ apoptosis của các tế bào TCMK‐1 bị thiếu oxy/hồi phục oxy kích thích, và thúc đẩy biểu hiện protein của các protein pro‐apoptotic như bax (P < 0.01) và cleaved‐caspase 3 (P < 0.01) và ức chế biểu hiện của protein kháng apoptosis bcl‐2 (P < 0.01), nhưng việc làm tắt CX3CR1 trong các đại thực bào có tác dụng bảo vệ. Cuối cùng, chúng tôi cũng phát hiện rằng sự bài tiết CX3CL1 hòa tan trong các đại thực bào RAW264.7 dưới điều kiện thiếu oxy/hồi phục oxy đã tăng lên đáng kể.Kết luậnCác phát hiện cho thấy rằng thiếu oxy/hồi phục oxy có thể thúc đẩy sự phân cực M1, sự di chuyển và khả năng bám dính của các đại thực bào, và rằng các đại thực bào phân cực gây ra sự apoptosis tiếp theo của tế bào biểu mô ống thận bị thiếu oxy bằng cách điều chỉnh con đường tín hiệu CX3CL1/CX3CR1.
