Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Sắc ký ái lực lectin axit boronic (BLAC). 2. Phân tích so sánh glycosyl hóa nhờ phương pháp vi phân ái lực
Tóm tắt
Để tiếp tục công trình của chúng tôi về sắc ký ái lực lectin axit boronic (BLAC), trong bài báo này, chúng tôi giới thiệu một phương pháp vi phân ái lực tự động sử dụng các đầu pipette vi chứa nhựa axit boronic và concanavalin A (BLAC/Con A) để phân lập và làm giàu các glycoprotein trong huyết thanh người. Các oligosaccharide liên kết N của các glycoprotein đã được phân tách được loại bỏ bằng cách tiêu hóa enzyme PNGase F, tiếp theo là gán nhãn với 8-aminopyrene-1,3,6-trisulfonic acid. Điện di gel mao quản với phát hiện huỳnh quang do LED xanh được áp dụng dưới dạng nhiều lần để phân tích so sánh glycan. Hiệu quả của vi phân ái lực BLAC được so sánh với hiệu quả làm giàu của lectin và pseudolectin riêng lẻ. Cuối cùng, chúng tôi báo cáo những phát hiện của mình về sự khác biệt trong quá trình glycosyl hóa ở các mẫu huyết thanh người từ bệnh nhân khỏe mạnh và bệnh nhân ung thư tuyến tiền liệt bằng cách áp dụng phương pháp làm giàu dựa trên đầu pipette vi BLAC/Con A và phân tích điện di gel mao quản so sánh của các glycan được giải phóng và gán nhãn.
Từ khóa
#sắc ký ái lực #lectin #axit boronic #glycosyl hóa #glycoprotein #điện di gel mao quản #huyết thanh ngườiTài liệu tham khảo
Kita Y, Yoshiaki M, Furukawa J-I, Nakano M, Shinohara Y et al (2007) Mol Cell Proteomics 6:1437–1445
Madera M, Mechref Y, Klouckova I, Novotny MV (2006) J Proteome Res 5:2348–2363
Fukuda MN (1990) Glycobiology 1:9–15
Nakahara S, Raz A (2008) Anti Cancer Agent Med Chem 8:22–36
Townsend RR, Hotchkiss AT (1997) Techniques in glycobiology. New York, Marcel Dekker
Hounsell EF, Davies MJ, Smith KD (1996) In: protein protocols handbook. pp 651–652
Harvey DJ (2001) Proteomics 1:311–328
Ortner K, Sivanandam VN, Buchberger W, Müller N (2007) Anal Bioanal Chem 388:173–177
Wilson NL, Schulz BL, Karlsson NG, Packer NH (2002) J Proteome Res 1:521–529
Sagi D, Kienz P, Denecke J, Marquardt T, Peter-Katalinic J (2005) J Proteomics 5:2689–2701
Kislinger T, Humeny A, Pischetsrieder M (2004) Curr Med Chem 11:2185–2193
Guttman A, Chen F-TA, Evangelista RA (1996) Electrophoresis 17:412–417
Guttman A, Chen F-TA, Evangelista RA, Cooke N (1996) Anal Biochem 233:234–242
Guttman A, Cooke N, Starr CM (1994) Electrophoresis 15:1518–1522
Olajos M, Hajos P, Bonn GK, Guttman A (2008) Anal Chem 80:4241–4246
Kobata A, Endo T (1992) J Chromatogr 597:111–122
Durham M, Regnier FE (2006) J Chromatogr, A 1132:165–173
Yang Y, Hancock WS (2004) J Chromatogr A 1053:79–88
Hageman JH, Kuehn GD (1992) Methods in molecular biology. Totowa, NJ, US 11:45–71
Monzo A, Bonn GK, Guttman A (2007) Anal Bioanal Chem 389:2097–2102