Một Hệ Thống Dịch MRNA Phụ Thuộc Hiệu Quả Từ Các Dịch Chuyển Tế Bào Reticulocyte

Trong bài báo này, một phương pháp đơn giản được mô tả để chuyển đổi dịch chiết không tế bào (lysate) từ tế bào reticulocyte của thỏ thành một hệ thống tổng hợp protein phụ thuộc vào mRNA. Dịch lysate được tiền ấp với CaCl₂ và nuclease micrococcal, sau đó thêm một lượng lớn ethyleneglycol-bis(2-aminoethylether)-N,N′-tetraacetic acid để chelat hóa Ca²⁺ và làm bất hoạt nuclease. Các lysate được xử lý theo cách này có hoạt tính gắn amino acid nội sinh không đáng kể, nhưng 75% hoạt tính của lysate ban đầu có thể được phục hồi bằng cách thêm mRNA globin. Hiệu suất sử dụng mRNA bổ sung và độ nhạy của hệ thống đều rất cao. Không thể phát hiện hoạt tính nuclease còn lại, và tRNA vẫn hoạt động bình thường. Một số loại mRNA khác nhau đã được chứng minh là được dịch mã một cách hiệu quả thành các sản phẩm có kích thước đầy đủ với khối lượng phân tử như mong đợi lên đến khoảng 200 000, và không có sự tích tụ các sản phẩm protein chưa hoàn thiện. Việc dịch mã hiệu quả RNA từ hai loại virus thực vật (virus mosaic thuốc lá và virus mosaic đậu) yêu cầu tRNA dị hợp.