Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Một phương pháp nhuộm nhiều màu mới sử dụng ethynyl deoxyuridine để phân tích phản ứng miễn dịch tại chỗ
Tóm tắt
Các phản ứng miễn dịch thường đi kèm với việc trình diện kháng nguyên và sự tăng sinh cũng như biệt hóa của các lymphocyte đặc hiệu kháng nguyên (sự tăng sinh miễn dịch), nhưng việc phân tích những sự kiện này tại chỗ trên các mảnh mô là rất khó khăn. Chúng tôi đã phát triển một phương pháp nhuộm miễn dịch huỳnh quang đa màu đồng thời mới cho miễn dịch mô học và phân tích dòng tế bào, sử dụng một dẫn xuất thymidine, 5-ethynyl-2′-deoxyuridine (EdU). Do kích thước nhỏ của thuốc nhuộm azide sử dụng hóa học click và loại bỏ các bước biến tính DNA, nhuộm EdU cho phép nhuộm huỳnh quang với ít nhất bốn màu bao gồm hai dấu hiệu khác nhau trên bề mặt tế bào đơn lẻ, điều này là không thể thực hiện với phương pháp 5-bromo-2′-deoxyuridine tiêu chuẩn. Bằng cách sử dụng hai mô hình chuột, các tham số được phát hiện thành công là các kháng nguyên cụm phân biệt bao gồm các dấu hiệu hình thái và chức năng của các tế bào miễn dịch khác nhau, các kháng nguyên phức hợp histocompatibility, và thậm chí một số yếu tố phiên mã hạt nhân. Các tế bào đang tăng sinh có thể được phân loại thêm và sử dụng cho phân tích RT-PCR. Phương pháp này do đó cho phép phân tích động học chức năng tại chỗ về các phản ứng miễn dịch tăng sinh trong một miền cụ thể của các cơ quan lympho, điều này được xác nhận định lượng bởi phân tích dòng tế bào.
Từ khóa
#miễn dịch học #nhuộm hữu cơ #tế bào miễn dịch #phản ứng miễn dịch #kỹ thuật phân tích dòng tế bàoTài liệu tham khảo
Beyersdorf N, Hanke T, Kerkau T, Hunig T (2005) Superagonistic anti-CD28 antibodies: potent activators of regulatory T cells for the therapy of autoimmune diseases. Ann Rheum Dis 64(Suppl 4):91–95. doi:10.1136/ard.2005.042564
Diermeier-Daucher S, Clarke ST, Hill D, Vollmann-Zwerenz A, Bradford JA, Brockhoff G (2009) Cell type specific applicability of 5-ethynyl-2′-deoxyuridine (EdU) for dynamic proliferation assessment in flow cytometry. Cytometry Part A : J Int Soc Anal Cytol 75:535–546. doi:10.1002/cyto.a.20712
Gottschalk RA, Corse E, Allison JP (2012) Expression of Helios in peripherally induced Foxp3 + regulatory T cells. J Immunol 188:976–980. doi:10.4049/jimmunol.1102964
Guo F, Ma J, McCauley E, Bannerman P, Pleasure D (2009) Early postnatal proteolipid promoter-expressing progenitors produce multilineage cells in vivo. J Neurosci: Off J Soc Neurosci 29:7256–7270. doi:10.1523/JNEUROSCI.5653-08.2009
Kampinga J, Kroese FG, Pol GH, Opstelten D, Seijen HG, Boot JH, Roser B, Nieuwenhuis P, Aspinall R (1990) RT7-defined alloantigens in rats are part of the leucocyte common antigen family. Scand J Immunol 31:699–710
Kitazawa Y, Fujino M, Li XK, Xie L, Ichimaru N, Okumi M, Nonomura N, Tsujimura A, Isaka Y, Kimura H, Hunig T, Takahara S (2009) Superagonist CD28 antibody preferentially expanded Foxp3-expressing nTreg cells and prevented graft-versus-host diseases. Cell Transplant 18:627–637
Matsuno K, Ezaki T, Kotani M (1989) Splenic outer periarterial lymphoid sheath (PALS): an immunoproliferative microenvironment constituted by antigen-laden marginal metallophils and ED2-positive macrophages in the rat. Cell Tissue Res 257:459–470
Matsuno K, Ueta H, Shu Z, Xue-Dong X, Sawanobori Y, Kitazawa Y, Bin Y, Yamashita M, Shi C (2010) The microstructure of secondary lymphoid organs that support immune cell trafficking. Arch Histol Cytol 73:1–21
Park CG, Rodriguez A, Ueta H, Lee H, Pack M, Matsuno K, Steinman RM (2012) Generation of anti-human DEC205/CD205 monoclonal antibodies that recognize epitopes conserved in different mammals. J Immunol Methods 377:15–22. doi:10.1016/j.jim.2011.12.009
Saiki T, Ezaki T, Ogawa M, Maeda K, Yagita H, Matsuno K (2001) In vivo roles of donor and host dendritic cells in allogeneic immune response: cluster formation with host proliferating T cells. J Leukoc Biol 69:705–712
Salic A, Mitchison TJ (2008) A chemical method for fast and sensitive detection of DNA synthesis in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A 105:2415–2420. doi:10.1073/pnas.0712168105
Sawanobori Y, Ueta H, Dijkstra CD, Park CG, Satou M, Kitazawa Y, Matsuno K (2014) Three distinct subsets of thymic epithelial cells in rats and mice defined by novel antibodies. Plos One 9:e109995. doi:10.1371/journal.pone.0109995
Ueta H, Shi C, Miyanari N, Xu XD, Zhou S, Yamashita M, Ezaki T, Matsuno K (2008) Systemic transmigration of allosensitizing donor dendritic cells to host secondary lymphoid organs after rat liver transplantation. Hepatology 47:1352–1362. doi:10.1002/hep.22161
Zhou S, Ueta H, Xu XD, Shi C, Matsuno K (2008) Predominant donor CD103 + CD8 + T cell infiltration into the gut epithelium during acute GvHD: a role of gut lymph nodes. Int Immunol 20:385–394. doi:10.1093/intimm/dxm153