Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Một phương pháp để chứng minh cytochrome oxidase bằng kính hiển vi điện tử trong các mô tươi và mô đã được định hình bằng formalin
Tóm tắt
Phản ứng Burstone được điều chỉnh cho mục đích sử dụng kính hiển vi điện tử. Các lát cắt có độ dày 300-500 μm được cắt bằng tay và ủ trong N-phenyl-p-phenylenediamine trong 60 phút ở nhiệt độ phòng. Không sử dụng tác nhân liên kết. Polymer thuốc nhuộm đạt được sẽ được tiền chelat hóa với dung dịch đồng sulfat 0.5% hòa tan trong dung dịch formalin đệm 4%. Sau khi rửa sạch kỹ lưỡng, tiến hành tiền chelat hóa lần hai bằng kali ferrocyanide. Việc tiền chelat hóa đôi làm giảm độ tan trong lipid cao của sản phẩm phản ứng, khiến cho sản phẩm có thể được nhúng vào nhựa epoxy. Việc cố định sau với acid osmium tạo thêm độ tương phản cho sản phẩm phản ứng. Cấu trúc tế bào - ngay cả trong mô thần kinh trung ương - có thể được bảo toàn một cách thỏa đáng mà không làm mất đáng kể hoạt động enzyme nhờ vào việc thực hiện một cuộc tưới formalin ngắn trước khi ủ. Sản phẩm phản ứng xuất hiện dưới dạng các giọt được định vị trong ty thể.
Từ khóa
#Burstone's reaction #electron microscopy #cytochrome oxidase #formalin-prefixed tissues #lipid solubility #mitochondrial localizationTài liệu tham khảo
Burstone, M. S.: New histochemical techniques for the demonstration of tissue oxidase (cytochrome oxidase). J. Histochem. Cytochem. 7, 112–122 (1959).
: Histochemical demonstration of cytochrome oxidase with new amine reagents. J. Histochem. Cytochem. 8, 63–70 (1960).
Hanker, J. S., A. R. Seaman, L. P. Weiss, H. Ueno, R. A. Bergman, and A. M. Seligman: Osmiophilic reagents: New cytochemical principle for light and electron microscopy. Science 146, 1039–1043 (1964).
Pease, D. C.: Histological techniques for electron microscopy, sec. ed. New York and London: Academic Press 1964.
Person, P., and A. Fine: Studies of indophenol blue synthesis: I. The role of free radical formation by heart muscle particulates during the “G” Nadi reaction. J. Histochem. Cytochem. 9, 190–196 (1961).
Reynolds, E. S.: The use of lead citrate at high pH as an electron-opaque stain in electron microscopy. J. Cell Biol. 17, 208–212 (1963).
Sabatini, D. D., K. Bensch, and R. J. Barrnett: Cytochemistry and electron microscopy. The preservation of cellular ultrastructure and enzymatic activity by aldehyde fixation. J. Cell Biol. 17, 19–58 (1963).
Seligman, A. M.: Some recent trends and advances in enzyme histochemistry. In: Second Int. Congr. of Histo- and Cytochemistry, Frankfurt/Main 1964 (ed. by T. H. Schiebler, A. G. E. Pearse, and H. H. Wolff. Berlin-Göttingen-Heidelberg: Springer 1964.
Szentágothai, J.: Complex synapses. In: Aus der Werkstatt der Anatomen, hrsg. von W. Bargmann. Stuttgart: Georg Thieme 1965.