Phương Pháp Phát Hiện Bằng Phim Đối Với Các Protein và Axit Nucleic Gắn Tritium Trong Gel Polyacrylamide

FEBS Journal - Tập 46 Số 1 - Trang 83-88 - 1974
William M. Bonner1,2, Ronald A. Laskey2
1Department of Health, Education and Welfare, National Institutes of Health, 9000 Rockville Pike, Bethesda, Maryland, U.S.A. 20014
2M. R. C. Laboratory of Molecular Biology, Postgraduate Medical School, University of Cambridge, Hills Road, Cambridge, Great Britain CB2 2QH

Tóm tắt

Trong nghiên cứu này, một phương pháp đơn giản để phát hiện 3H trong gel polyacrylamide bằng kỹ thuật tự phát quang (scintillation autography) sử dụng phim X-quang được mô tả. Gel được khử nước trong dimethyl sulfoxide, ngâm trong dung dịch 2,5-diphenyloxazole (PPO) trong dimethyl sulfoxide, sau đó được làm khô và tiếp xúc với phim RP Royal “X-Omat” ở nhiệt độ -70 °C. Các điều kiện tối ưu cho từng bước được mô tả chi tiết. Các hạt β từ 3H tương tác với 2,5-diphenyloxazole phát ra ánh sáng, dẫn đến việc làm đen cục bộ trên phim X-quang. Hình ảnh được tạo ra tương tự như hình ảnh thu được từ autoradiography cổ điển của các đồng vị có năng lượng phát ra cao hơn như 14C. Có thể phát hiện được 3000 dis. 3H/phút trong một dải trong gel trong thời gian phơi sáng 24 giờ. Tương tự, 500 dis./phút cũng có thể được phát hiện trong một tuần.Khi áp dụng để phát hiện 35S và 14C trong gel polyacrylamide, phương pháp này nhạy hơn gấp mười lần so với autoradiography thông thường. Có thể phát hiện 130 dis. 35S hoặc 14C/phút trong một dải trong gel trong thời gian 24 giờ.

Từ khóa

#phát hiện tritium #gel polyacrylamide #phương pháp tự phát quang #protein gắn tritium #axit nucleic gắn tritium

Tài liệu tham khảo

10.1038/182524a0

10.1016/0003-2697(70)90100-4

10.1038/227680a0

10.1073/pnas.69.12.3665

10.1021/bi00842a023

10.1016/0022-2836(70)90069-0

10.1016/S0021-9673(01)80075-3

Thông tin
Thông tin xuất bản

FEBS Journal

Tập 46 Số 1

83-88

Thông tin tác giả