Phương Pháp Phát Hiện Bằng Phim Đối Với Các Protein và Axit Nucleic Gắn Tritium Trong Gel Polyacrylamide

Trong nghiên cứu này, một phương pháp đơn giản để phát hiện ³H trong gel polyacrylamide bằng kỹ thuật tự phát quang (scintillation autography) sử dụng phim X-quang được mô tả. Gel được khử nước trong dimethyl sulfoxide, ngâm trong dung dịch 2,5-diphenyloxazole (PPO) trong dimethyl sulfoxide, sau đó được làm khô và tiếp xúc với phim RP Royal “X-Omat” ở nhiệt độ -70 °C. Các điều kiện tối ưu cho từng bước được mô tả chi tiết. Các hạt β từ ³H tương tác với 2,5-diphenyloxazole phát ra ánh sáng, dẫn đến việc làm đen cục bộ trên phim X-quang. Hình ảnh được tạo ra tương tự như hình ảnh thu được từ autoradiography cổ điển của các đồng vị có năng lượng phát ra cao hơn như ¹⁴C. Có thể phát hiện được 3000 dis. ³H/phút trong một dải trong gel trong thời gian phơi sáng 24 giờ. Tương tự, 500 dis./phút cũng có thể được phát hiện trong một tuần.

Khi áp dụng để phát hiện ³⁵S và ¹⁴C trong gel polyacrylamide, phương pháp này nhạy hơn gấp mười lần so với autoradiography thông thường. Có thể phát hiện 130 dis. ³⁵S hoặc ¹⁴C/phút trong một dải trong gel trong thời gian 24 giờ.