Nhúng hoa: một phương pháp đơn giản hóa choAgrobacterium-trung gian biến đổiArabidopsis thaliana

Plant Journal - Tập 16 Số 6 - Trang 735-743 - 1998
Steven J. Clough1, Andrew F. Bent2
1Department of Crop Sciences, University of Illinois at Urbana-Champaign, 61801, USA.
2Department of Crop Sciences, University of Illinois at Urbana-Champaign, 1201 W Gregory Dr., Urbana, IL, 61801, USA

Tóm tắt

Tóm tắt

Phương pháp Agrobacterium nhúng chân không đã tạo điều kiện để biến đổi Arabidopsis thaliana mà không cần nuôi cấy mô thực vật hoặc tái sinh. Trong nghiên cứu hiện tại, phương pháp này đã được đánh giá và một phương pháp biến đổi đã được cải tiến đáng kể. Quá trình nhúng chân không tốn sức lao động đã được loại bỏ để thay thế bằng việc nhúng các mô hoa đang phát triển vào dung dịch chứa Agrobacterium tumefaciens , 5% sucrose và 500 microlit trên lít chất hoạt động bề mặt Silwet L-77. Sucrose và chất hoạt động bề mặt là yếu tố quan trọng cho sự thành công của phương pháp nhúng hoa. Cây trồng được tiêm nhiễm khi có nhiều chồi hoa non và ít quả đã cho ra thế hệ biến đổi với tỷ lệ cao nhất. Môi trường nuôi cấy mô thực vật, hormone benzylaminopurine và điều chỉnh pH không cần thiết, và Agrobacterium có thể được áp dụng cho cây trồng với nhiều mật độ tế bào khác nhau. Việc lặp lại việc áp dụng Agrobacterium đã cải thiện tỷ lệ biến đổi và tổng năng suất cây biến đổi lên khoảng gấp đôi. Che phủ cây trồng trong 1 ngày để giữ độ ẩm sau khi tiêm nhiễm cũng làm tăng tỷ lệ biến đổi gấp đôi. Nhiều loại sinh thái khác nhau có thể được biến đổi bằng phương pháp này. Phương pháp đã được cải tiến này sẽ tạo điều kiện cho sự biến đổi cao qua việc hỗ trợ cho các nỗ lực như đánh dấu gen T-DNA, cloning vị trí, hoặc các nỗ lực thay thế gen mục tiêu.

Từ khóa


Tài liệu tham khảo

Ausubel F.M., 1997, Current Protocols in Molecular Biology

10.1016/S0168-9525(97)01094-9

Bechtold N., 1993, In planta Agrobacterium mediated gene transfer by infiltration of adult Arabidopsis thaliana plants., C. R. Acad. Sci. Paris, Life Sciences, 316, 1194

Bent A.F., 1998, Plant Molecular Biology Manual, 1

10.1126/science.8091210

Bouchez D., 1993, A binary vector based on basta resistance for in planta transformation of, Arabidopsis Thaliana. C. R. Acad. Sci. Paris, Life Sciences, 316, 1188

10.1046/j.1365-313X.1994.5040551.x

10.1016/S1360-1385(96)10047-9

10.1142/9789814439701_0010

10.1007/BF00330414

10.1007/BF00297277

10.1073/pnas.94.6.2122

10.1126/science.280.5365.918

10.1007/BF01977351

10.1007/BF00015604

10.1007/BF00290117

10.1073/pnas.86.21.8467

10.1007/BF00331014

10.1105/tpc.5.8.865

10.1007/BF00028894

10.1128/jb.174.4.1189-1196.1992

Mollier P., 1995, Promoterless gusA expression in a large number of Arabidopsis thaliana transformants obtained by the in planta infiltration method., C. R. Acad. Sci. Paris, Life Sciences, 318, 465

10.1105/tpc.9.3.317

10.1007/BF00027558

10.1071/PP97109

Siemens J., 1996, Transgenic plants: genetic transformation – recent developments and state of the art., Plant Tissue Culture and Biotech., 2, 66

10.1073/pnas.85.15.5536

10.1146/annurev.ge.22.120188.002225

Whalen M., 1991, Identification of Pseudomonas syringae pathogens of Arabidopsis thaliana and a bacterial gene determining avirulence on both Arabidopsis and soybean., Plant Cell, 3, 49

Winans S.C., 1992, Two‐way chemical signaling in Agrobacterium–plant interactions., Microbiol. Rev., 56, 12, 10.1128/mr.56.1.12-31.1992

Thông tin
Thông tin xuất bản

Plant Journal

Tập 16 Số 6

735-743

Thông tin tác giả